Упрощенная HTML-версия
дифференциальной G-окраской хромосом. Данный метод обеспечивает надежное выявле
ние большинства хромосомных аберраций.
Кариотипические исследования позволяют выделить, например, цитогенетические
субварианты острого лимфобластного лейкоза: ОЛЛ с t(9;22) или ОЛЛ с t(4;11)), имеющие
клинические особенности и неблагоприятный прогноз. С помощью этого метода у 95%
взрослых больных хроническим миелозом в лейкозных клетках обнаруживается трансло
кация t(9;22). Подобная транслокация встречается и у детей с так называемым взрослым
(adult) типом хронического миелоза. Появление вследствие указанного перемещения
наследственного материала укороченной
2 2
-й хромосомы (филадельфийской хромосомы,
Ph-хромосомы) является одним из основных дифференциально-диагностических призна
ков данного заболевания. Ph-негативная форма хронического миелоза (ювенильный тип)
обнаруживается у детей в возрасте моложе
2
лет и практически не поддается химиотера
пии. Средняя продолжительность жизни пациентов составляет 9 месяцев от момента по
становки диагноза.
Молекулярно-генетический анализ. Наиболее широкое применение для молекулярной
диагностики лейкозов получили методы ДНК-гибридизации и полимеразная цепная реак
ция. В основе методов
ДНК-гибридизации
лежит способность комплементарных последо
вательностей ДНК к спариванию, которая позволяет использовать меченые фрагменты
ДНК в качестве зондов для обнаружения специфических участков генов в исследуемом
материале. Наиболее широко в диагностической практике используется ДНК-зондовая ги
бридизация по Саузерну (Southern blotting) и флюоресцентная ДНК-гибридизация in situ.
Полимеразная цепная реакция
(ПЦР) представляет собой ферментативный процесс
репликации заданных участков ДНК, осуществляемый in vitro. Для того чтобы ограничить
область репликации последовательностью определенной длины, в реактивную смесь вно
сят праймеры (16-24-членные олигонуклеотиды), комплементарные концам участка ДНК,
подлежащего амплификации. ПЦР представляет собой циклический процесс, который
включает фазы денатурации ДНК (расплетание цепей), отжига (посадки праймеров) и
синтеза (элонгации) заданных последовательностей ДНК. В каждом цикле ПЦР происхо
дит удвоение числа копий исследуемого участка ДНК, что позволяет по истечении 20-30
циклов накопить в реакционной среде от 10
6
до 10
9
молекул ДНК заданной длины (обыч
но от 150 до 900 азотистых оснований) и известной нуклеотидной последовательности.
Наличие продуктов ПЦР и их молекулярная масса определяется посредством электрофо
реза в агарозном геле.
По своей чувствительности ПЦР, по меньшей мере, в 1000 раз превосходит метод
ДНК-гибридизации, позволяя обнаружить 1 опухолевую клетку на 10
6
нормальных. Одна
ко, высокая стоимость иммунологических, цитогенетических и молекулярно-генетических
методов исследования не позволяет использовать их в каждой онкогематологической кли
нике.
6. Патофизиологические основы терапии лейкозов
После установления диагноза «лейкоз» необходима незамедлительная комбинирован
ная цитостатическая полихимиотерапия. Точка приложения действия цитостатических
препаратов - внутриклеточный обмен, нарушая который, они приводят к прекращению
синтеза жизненно важных субстанций, торможению развития и гибели лейкозной клетки.
Уничтожение опухолевых клеток химиопрепаратами осуществляется также посредством
активации в них генетически детерминированной программы апоптоза. Противоопухоле
вые препараты включают апоптоз в основном через 2 сигнальные системы: через ген Р53
и через FAS-R/TNF. Для реализации этой программы необходимы следующие условия:
проникновение препарата в клетку, создание адекватной внутриклеточной концентрации
активной формы препарата; наличие внутриклеточных мишеней, воспринимающих дей
ствие препарата и включающих при этом программу апоптоза; возможность опухолевой