Упрощенная HTML-версия
Предпочтение, отдаваемое цитохимическим методам при установлении формы остро
го лейкоза, обусловлено тем, что цитоморфологические особенности лейкемических кле
ток при опухолевой прогрессии претерпевает более существенные изменения, чем цито
химические, что может служить причиной ошибок при определении их линейной принад
лежности.
Часто лейкемические лимфобласты не имеют характерных морфологических и цито
химических признаков. Поэтому основной задачей морфоцитохимической диагностики
ОЛЛ является демонстрация отсутствия проявлений миелоидной (гранулоцитарной, мо-
ноцитарной, эритроидной и мегакариоцитарной) дифференцировки бластных клеток
(морфология и цитохимия отрицания).
Иммунологические исследования. Основы иммунодиагностики лейкозов были зало
жены в 70-х годах ХХ века, когда впервые для исследования лейкозных клеток были ис
пользованы реакции розеткообразования и иммунофлюоресценции. Были выявлены мар
керы Т- и В-лимфоцитов. Исследования показали, что 10-15% ОЛЛ составляет Т-
клеточный ОЛЛ (Т-ОЛЛ), 1-3% - В-ОЛЛ. Остальные случаи не имели признаков Т- или В-
клеточной дифференцировки и были обозначены как не-Т, не-В-ОЛЛ. Дифференцирован
ные варианты ОЛЛ (Т-ОЛЛ и В-ОЛЛ) имели клинические особенности и плохой прогноз.
Создание в 1975 г. гибридомной технологии получения моноклональных антител яви
лось новой вехой в иммунодиагностике гемобластозов. Моноклональные антитела позво
ляют идентифицировать отдельные детерминанты в сложных композициях антигенных
структур. С их помощью в настоящее время выявлено более 200 ранее неизвестных струк
тур, локализованных на мембранах клеток различных ростков гемопоэза. Многие из анти
генов классифицированы в соответствии с кластерами дифференцировки ^D ) , утвер
жденными на международных рабочих совещаниях по лейкоцитарным антигенам.
Дифференцировочные антигены - это структуры клетки, которые указывают на
направление и стадию дифференцировки гемопоэтических клеток, а в случае гемобласто-
зов - на источник происхождения злокачественного клона. Это делает возможным опре
деление формы лейкоза.
При большинстве острых лейкозов бластные клетки имеют иммунофенотипы, срав
нимые с иммунофенотипами нормальных гемопоэтических клеток аналогичных стадий
дифференцировки. Но доказано, что нормальные дифференцировочные антигены могут
обнаруживаться на злокачественных клетках в комбинациях, которые очень редко встре
чаются и не выявляются в нормальном костном мозге. Лейкемические клетки можно от
личить от их нормальных аналогов по ряду критериев:
- во-первых, это
аберрантная экспрессия —
коэкспрессия антигенов нескольких ли
ний;
- во-вторых,
асинхронная экспрессия
- экспрессия одновременно «раннего» и «позд
него» антигенов, которые в норме находятся на разных этапах созревания клетки. Напри
мер, CD34 и CD13; CD34 и CD15; CD15 и CD117;
- в-третьих,
избыточная экспрессия,
когда плотность распределения антигенов на
лейкозной клетке больше, чем на нормальных клетках крови. Для CD34 такая ситуация
встречается в 16% случаев ОМЛ, для CD14 - в 19% случаев ОМЛ;
- в-четвертых,
отсутствие экспрессии.
Например, отмечается потеря CD33 в 21%
случаев ОМЛ, CD11b в
6
% случаев ОМЛ.
Кроме перечисленных выше стандартных методов диагностики лейкозов, в гематоло
гических клиниках дополнительно применяются цитогенетический метод и метод моле
кулярно-генетического анализа лейкемических популяций.
В цитогенетическом анализе лейкозных клеток продолжает играть ведущую роль тра
диционный метод дифференциальной окраски хромосом в метафазных пластинках. Суще
ствуют 4 основные дифференциальные окраски: G-, Q-, R-, C-окраска. Для анализа карио-
типа лейкозных клеток, как правило, используется метод краткосрочного культивирова
ния клеток костного мозга в отсутствие стимуляторов клеточного деления с последующей