Упрощенная HTML-версия
54
2.
иммунофенотипирование
лимфоцитов
методом
проточной
цитофлуориметрии на приборе FC-500 (Bekman Coulter, США) с
использованием моноклональных антител CD3 – FITS/ CD4 – PE, CD3 – FITS/
CD8 – PE, CD3 – FITS/ HLA-DR – PE, CD3 – FITS/ CD16+CD56 – PE, CD25
ECD, CD95 - PE. В периферической крови определяли процентное содержание
следующих субпопуляций лимфоцитов: Т-лимфоцитов (CD3
+
), Т-
хелперов/индукторов (CD3
+
/CD4
+
) и Т- цитотоксических лимфоцитов
/супрессоров (CD3
+
/CD8
+
), натуральных киллеров (CD16
+
), В-лимфоцитов (CD
20
+
). Степень ранней активации лимфоцитов определяли по экспрессии ими
CD25
+
(рецептор интерлейкина-2), поздней активации - по экспрессии HLA-
DR
+
. Возможный исход лимфоцитов в апоптоз оценивали по экспрессии на их
поверхности СD95
+
(Fas-антиген, опосредующий апоптоз). Также рассчитывали
величину иммунорегуляторного индекса - ИРИ=СD4абс./СD8абс.
3.Уровень
основных
классов
иммуноглобулинов
определяли
турбодиметрически на анализаторе «Турбакс +» (Финляндия).
4.Активность фагоцитоза выявляли по поглощению нейтрофилами инертных
частиц латекса (1,5 – 2 мкм).
5.Функциональное
состояние
нейтрофилов
оценивали
спектрофотометрически, регистрируя образование формазана из нитросинего
тетразолия (НСТ) (Б.В. Пинегин, 1991). Восстановление НСТ в фагоците прямо
зависит от метаболических путей в клетке, в которых нарабатывается
супероксид и его производные с ярко выраженными антимикробными
свойствами. Для выявления резервов бактерицидной функции нейтрофилов
применяли стимулированный НСТ – тест с добавлением стимулятора
фагоцитоза (латекс).
6. Определение содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в
сыворотке крови проводили методом жидкостной преципитации в 3,75%-ном
полиэтиленгликоле (ПЭГ-6000).