Упрощенная HTML-версия
55
7. Определение цитокинов (IL-8, TNFα) в сыворотке крови и БАЛЖ
проводилось с помощью набора реагентов Pro CON TNF-α, Pro CON IL-8 (ООО
«Протеиновый контур», г. Санкт – Петербург) методом твердофазного
иммуноферментного анализа (ИФА) при поступлении больных в клинику и
спустя 7 дней от момента госпитализации.
8.
Уровень
секреторного иммуноглобулина А (sJgA) в БАЛЖ определяли
методом ИФА (тест- системы ООО «Вектор-Бест», г. Новосибирск) [13].
9. Исследование интенсивности свободнорадикального окисления сыворотки
крови проводилось методом Fe2+-индуцированной
хемилюминесценции.
Забор крови для исследования осуществляли в день поступления пациентов в
стационар и спустя 7 дней от момента госпитализации. Цельную кровь
центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин. 0,5 мл приготовленной
сыворотки разводили в 20 мл солевого буфера. Величину рН полученного
раствора доводили до 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором КОН и
помещали в кюветную камеру прибора ХЛ-003. Свечение индуцировали
добавлением 1 мл 50 мМ раствора FeSO
4
7Н
2
О, ускоряющего процессы
перекисного окисления липидов. Протекающий свободнорадикальный процесс
регистрировали в течение 10 мин. При этом регистрировали значение таких
параметров как спонтанная светимость (у.е.), вспышка (у.е.), амплитуда
которой пропорциональна уровню свободнорадикального окисления, и
светосумма (у.е.×мин), величина которой обратно пропорциональна общей
антиоксидантной активности [62]. Интенсивность хемилюминесценции
характеризует способность липидов подвергаться перекисному окислению.
Полученные результаты сравнивали с аналогичными показателями
контрольной группы.
Расшифровка результатов хемилюминесценции.
Вспышка соответствует
активности ферментов прооксидантной системы (быстрая волна). После
вспышки – медленная волна, которая соответствует активности
антиоксидантной системы. В норме вспышка (активация ПОЛ) достаточно