Упрощенная HTML-версия
51
75
0
этанола. Пробирки сушили с открытыми крышками 15 мин при 37
0
C.
Далее осадок растворяли в 200 мл деионизованной воды и хранили при –
200C.
Для определения полиморфных локусов C+3953T, C-511T гена IL-1β и
VNTR-полиморфизма во 2 интроне гена IL-1RN использовали
олигонуклеотидные праймеры, синтезированные в институте химической
биологии и фундаментальной медицины СО РАН (г. Новосибирск).
Структуры праймеров и программа амплификации приведены в таблицах 3 и
4.
Таблица 3
Последовательность олигонуклеотидных праймеров.
Название
гена
Полиморфный
локус
Последовательность праймеров
IL-1β
C+3953T
(U)5’TCCTACTGGTGTTGTCATCAG3’
(R)5’CTTGGGTGGACATGGTCCTG3’
IL-1β
C-511T
(U)5’AAAGAGGCAAAGGAGGGTGTTC3’
(R)5’GGGTACAATGAAGGGCCAATAG3’
IL-1RN
Интрон 2 86 п.н.
VNTR
(U)5’CCCACTCATGGCCTTGTTC3’
(R)5’GGCTCAATGGTACCACATC3’
Амплификацию проводили в буфере, содержащем 10 мМ Трис-HCl (pH
8,9), 50 мМ KCl, 1,7 мМ MgCl, 0,05% Tween 20, с добавлением 0,2 мМ-ого
раствора dNTP, 0,5 мкМ-ого раствора праймеров, 20 нг ДНК и 1,0 ед. акт.