Упрощенная HTML-версия
45
Экспрессии генов TLR-2 Arg(-753)→Gly, TLR-4 Asp(-299)→Gly и TLR-6
Ser(-249)→Pro оценивали с помощью методов обратной транскрипции и
полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Генотипирование полиморфизма гена TLR-2 Arg(-753)→Gly
Детекция полиморфизма Arg (-753)→Gly гена TLR-2 проводилась
методом аллельспецифической ПЦР. Структура праймеров: прямой - 5’-
GCCT-ACTGG-GTGGA-ACCT-3’; обратный - 5’-GGССA-CTCCA-GGTAG-
GTCTT-3’. ПЦР смесь объёмом 25 мкл включала: 15 ммоль/л Трис-HCI (pH
8,0), 50 ммоль/л KCl, 2,0 ммоль/л MgCl
2
, каждого праймера по 2,5 мкM, по
50 μмоль/л раствора каждого из четырех dNTP, KCI 15 мM, MgCI
2
, 1,5 мM,
глицерин 4%, 2,5 единицы AmpliТag Gold полимеразы, 0,2-0,5мкг ДНК.
Детекция ПЦР продукта проводилась методом электрофореза в 4%
полиакриламидном геле с последующей окраской бромистым этидием.
Генотипирование полиморфизма гена TLR-4 Asp(-299)→Gly
Детекция полиморфизма Asp(-299)→Gly гена TLR-4 проводилась
методом аллельспецифической ПЦР. Структура праймеров: прямой - 5’-
GATTAG-CATAC-TTAGA-CTACTA-CCTCGA-3’ и обратный - 5’-GATCA-
ACTTC-TGAAA-AAGCA-TTCC-CACC-3’. Амплификацию проводили в
следующем температурном режиме: 95°С – 10 мин (первый цикл), 95°С – 30
мин (второй цикл), 62°C - 25 мин (третий цикл) и 72°C - 5 мин. (последний
цикл). ПЦР смесь объёмом 25 мкл включала: 15 ммоль/л Трис-HCI (pH 8,0),
50 ммоль/л KCl, 4,0 ммоль/л MgCl
2
, каждого праймера по 2,5 мкM, по 50
μмоль/л раствора каждого из четырех dNTP, KCI 15 мM, MgCI
2
, 1,5 мM,
глицерин 4%, 2,5 единицы AmpliТag Gold полимеразы, 0,2 - 0,5мкг ДНК.
Детекция ПЦР продукта проводилась методом электрофореза в 8%
полиакриламидном геле с последующей окраской бромистым этидием.
Генотипирование полиморфизма гена TLR-6 Ser(-249)→Pro