Упрощенная HTML-версия
42
72
о
С – 1 мин
95
о
С – 25 сек
62
о
С – 25 сек 25 циклов
72
о
С – 25 сек
Генотипирование полиморфизма гена IL-1β (C/C; С/T; T/T) при C(-511)→T
Детекцию полиморфизма –C260T гена IL-1β проводили с помощью
аллельспецифической ПЦР. Структура праймеров: прямой: 5’-AAAGA-
GGCAA-AGGAG-GGTGG-TTC-3’, обратный 5’-GGGTA-CAATG-AAGGG-
CCAA-TAG-3’.
Параметры температурных циклов:
95
o
С – 3 мин - 1 цикл
95
o
С – 10 сек
64
o
С – 0 сек 40 циклов
72
o
С – 5 сек
72
o
С - 2,5 мин - 1 цикл
Для определения полиморфных вариантов гена IL-1β C(-511)→T
использовали ПЦР с дальнейшей рестрикцией ПЦР-продукта эндонуклеазой
рестрикции TaqI, при этом выделялось 2 фрагмента, размерами 146 п.н. и 404
п.н. Анализ продуктов амплификации и рестрикции проводили методом
электрофореза в 8 % полиакриламидном геле.
Генотипирование полиморфизма гена IL-2 T(-330)→G
Детекцию полиморфизма –Т330G гена IL-2 проводили с помощью
аллельспецифической ПЦР. Структура праймеров: прямой: AS 5’-tattca-
catgtt-cagtgg-tagttct-3’, обратный S 5’-acatta-gccca-cactta-ggt-3’. Температура
отжига 48°С. Рестрикцию ПЦР-продукта осуществляли с помощью
рестриктазы Маe I, с последующей инкубацией при 48°C.
Амплифицированную ДНК переосаждали 20%-ным полиэтиленгликолем
(ПЭГ 6000), содержащим 2,5 М NaCl, в соотношении 1:1 (по объёму) к ПЦР-
продукту. Смесь прогревали 10 мин при 37
о
С, центрифугировали 10 мин при
12000 об/мин, осадок промывали 80%-ным этанолом. После переосаждения