Упрощенная HTML-версия
уровень ХЛ, обозначаемый как ХЛ к Расчет антиоксидантной активности препарата
проводится по формуле:
100%=x%,
где X - антиоксидантная активность в процентах.
Следует проводить не менее 3 параллельных измерений антиоксидантной активности
каждого исследуемого препарата. Определение хелатирующей способности препарата
На поверхности волокон хризотил-асбеста, содержащей ионы железа, происходит
разложение пероксида водорода с образованием гидроксильного радикала. Этот процесс
подобен действию фермента пероксидазы.
Этот процесс полностью или частично блокируется, если исследуемый препарат
связывает ионы железа на поверхности асбеста.
Для характеристики хелаторных свойств препарата вначале проводятся три
предварительные серии эксперимента. Определяется интенсивность вспышки ХЛ при
разложении стандартного количества Н 2 О 2 ферментом пероксидазой. Для этого в кювету
прибора с 1 мл среды, содержащей ПО мМ NaCI, 15,4 мМ Na 2 HPO 4 , х 2Н 2 О (рН 7,4) и 10 -5
М люминола (рН 7,4-7,45), последовательно добавляют раствор Н 2 О 2 в конечной
концентрации 2,5 х 10 -7 М. Наблюдаемое при этом свечение обозначают как ХЛ исходная .
Затем выясняют возможность непосредственного взаимодействия препарата с Н 2 О 2 . Для
этого определяют интенсивность вспышки ХЛ при добавлении в кювету со стандартной
средой и стандартным количеством пероксида водорода 0,05 мл исследуемого препарата и
через 2 минуты - избытка фермента пероксидазы хрена. Результат измерения ХЛ обозначают
как ХЛ препарат . Если препарат не взаимодействует с Н 2 О 2 , то светосумма ХЛ не
изменяется. Далее выясняется степень разложения Н 2 О 2 на волокнах хризотил-асбеста. Для
этого определяется интенсивность вспышки ХЛ при добавлении в кювету прибора,
содержащую стандартную среду и стандартное количество пероксида водорода, суспензии
хризотил-асбеста 0,5 мг/мл и через 2 минуты - избытка фермента пероксидазы хрена.
Результат обозначается как ХЛ асбест .
В опытной серии в кювету прибора со стандартной средой вначале вводится 0,5 мл
исследуемого препарата, затем 0,5 мг/мл суспензии хризотил-асбеста, через 2 минуты -
стандартное количество пероксида водорода и еще через 2 минуты - избыток фермента
пероксидазы хрена. Полученную светосумму свечения обозначают как ХЛ опыт .
Расчет хелатирующей способности препарата производят по формуле:
ХЛ исходная – ХЛ препарат – ХЛ асбест – ХЛ опыт
У = ––––––––––––––––––––––––––––––– 100%
ХЛ испытания – ХЛ препарат – ХЛ асбест
где У - хелатирующая способность препарата в процентах.
Исследуемый препарат является тем более перспективным, чем выше его
антиоксидантная и хелатирующая активности. Дальнейшее исследование перспективного
препарата проводится в соответствии с требованиями Фармакологического комитета РФ.