Упрощенная HTML-версия
диметилсульфоксидом (конечная концентрация в инкубационной смеси не должна быть
более 2,5 %).
6.7.3.5. Проведение эксперимента
Необходимые для проведения эксперимента оборудование, посуда, реактивы,
питательные смеси и растворы, проведение работ по получению фракции S9, а также
регламент работы с бактериальными культурами с использованием анализатора «Bioscreen»
описаны (Huttunen).
Опыт параллельно ведут с использованием микросомальной активирующей смеси и
без нее для регистрации действия как прямых мутагенов, так и непрямых, активность
которых связана с образованием мутагенных метаболитов, учитываемых при работе с
микросомальной фракцией. В контрольных вариантах опыта вместо испытуемого образца
вносят соответствующий объем растворителя.
В автоматизированном варианте SOS-хромотеста ферментативная реакция
определяется в кинетическом режиме в течение 30 минут. Тест можно проводить с помощью
автоматизированного микробиологического анализатора «Bioscreen» фирмы Labsystems
(Финляндия), управляемого ПК по программе «SOS Chromotest». С помощью этой
программы можно исследовать способность исследуемых веществ активировать SOS-систему
как в условиях метаболической активации, так и без нее. В анализаторе использован принцип
вертикальной фотометрии, реакция проводится в стерильных пластиковых «сотовых»
плашках с оптически прозрачными дном и крышкой, возможно одновременное исследование
до 3 веществ с активацией и без активации и до 8 веществ без активации. Инкубацию можно
проводить как в анализаторе, так и вне его, время инкубации можно изменять.
6.7.4. Данные и их представление
6.7.4.1. Обработка результатов
Обработка результатов проводится по программе, предложенной фирмой Labsystems.
Программа обработки результатов определяет для каждой концентрации исследуемого
вещества отношение активности b-галактозидазы к активности щелочной фосфатазы,
нормализует эти отношения на начальный момент времени и вычисляет фактор индукции.
Затем автоматически строятся кривые зависимости фактора индукции от концентрации
исследуемого вещества и определяется наклон кривой на ее линейной участке.
6.7.4.2. Оценка результатов
Результаты анализируют по программе «SOS Data Processing», описанной в
инструкции к прибору. Получают кривые развития окраски в каждой пробе, доза-зависимые
кривые для каждого исследуемого вещества и контролей и кривые изменения фактора
индукции в зависимости от концентрации вещества. По их линейной части определяют SOS-
индуцирующий потенциал (SOSIP). Отчет должен включать следующую информацию:
– бактерии: использованные штаммы;
– условия проведения теста: уровни концентраций и обоснование выбора
концентраций, количество культур на экспериментальную точку, состав среды, тип и состав
системы метаболической активации, методика обработки, позитивные и негативные
контроли;
– индивидуальные результаты для каждой культуры;