Упрощенная HTML-версия
6.7. SOS-XPOMOTECT НА Escherichia coli
6.7.1. Термины и определения
SOS-хромотест на Е. coli является бактериальной тест-системой для учета индукции
SOS-функций при действии химических соединений и/или их метаболитов, вызывающих
нарушения репликации и/или повреждения ДНК в геноме этого организма.
6.7.2. Цель исследования и принцип метода
Данный метод предназначен для выявления способности фармакологических веществ
и (или) их метаболитов индуцировать SOS-функции у индикаторных штаммов Е. coli
(Quillardet et al., 1982).
В SOS-хромотесте используют штамм E.coli PQ37, в геноме которого ген lacZ
(структурный ген фермента b-галактозидазы) находится под контролем промотора гена sfiA,
определяющего одну из SOS-функций клетки и контролируемого генеральным репрессором
SOS-системы. Экспрессия гена sfIA индуцируется после повреждения ДНК или остановке
репликации как часть SOS-ответа клетки Е. coli. SOS-экспрессия колориметрически
определяется по активности b-галактозидазы.
6.7.3. Процедура тестирования
6.7.3.1. Бактерии
В качестве тестерных организмов используется штамм Е. coli PQ37. Возможно
использование других штаммов.
6.7.3.2. Метаболическая активация
В
качестве экзогенной метаболической активации используется фракция S9 печени
крыс, предобработанных Арохлором 1254 или соволом (300 мг/кг, однократно,
внутрибрюшинно, за 5 суток до забоя).
6.7.3.3. Изучаемые концентрации
Максимальная концентрация тестируемого соединения определяется его
токсичностью и растворимостью. Токсичность тестируемого соединения может изменяться
при использовании экзогенной метаболической активации. Для нетоксичных хорошо
растворимых соединений максимальная концентрация может быть в пределах 1000-5000
мкг/мл. Для тестируемых соединений с бактерицидной активностью максимальная
концентрация должна подавлять рост бактерий не более чем на 50 %. В любом случае должно
проверяться не менее 10 различных концентраций тестируемого соединения, различающихся
например в 2 раза.
6.7.3.4. Контроли
В
каждом эксперименте обязательны одновременно проводимые негативный
(необработанный или растворитель) и позитивный контроли на штамм (например, 4-
нитрохинолин-1-оксид) и систему метаболической активации (например, 2-аминоант-рацен).
В
качестве
растворителя
используется
физиологический
раствор
с
10%