Упрощенная HTML-версия
16
увеличению фонового окрашивания, ксилолы и спирты использовали
для обработки не более 30 стекол.
После промывания срезов в дистиллированной воде (5 минут) и
помещения их в трис-буфер на 5 минут с целью повышения специфич-
ности реакции проводили демаскировку антигенов в СВЧ-печи при
режиме мощности 750 Вт в течение 5 минут (Эллиниди В.Н. и др.,
2002). Давали срезам остыть до комнатной температуры, помещая их в
трис-буфер на 20-25 минут. Для уменьшения фона и снижения неспе-
цифического окрашивания осуществляли блокирование эндогенной
пероксидазы 3%-ным раствором перекиси водорода в течение 5 минут
и обработкой протеин-блоком - 20 минут. В дальнейшем проводили
инкубацию с первичными антителами - 60 мин (37
0
С), после которой
срезы помещали в трис-буфер – 3 порции по 5 мин.
Затем срезы обрабатывали вторыми (биотилинированными) ан-
тителами - 20 минут и инкубировали со стрептавидин-биотин-
пероксидазным комплексом - 20 минут.
Проводилась окраска хромогеном с визуальным контролем в те-
чение 5-30 минут. В качестве докраски использовали гематоксилин
или метиленовый зеленый.
Иммуногистохимические методы исследования выполнены сов-
местно с иммуноморфологической группой ЦНИЛ Омской государ-
ственной медицинской академии (руководитель – кандидат медицин-
ских наук Е.А.Потрохова).
3. Морфометрическими методами
в гистологических препара-
тах оценивали состояние гистиоархитектоники псориатической папу-
лы. Исключали препараты с тангенциальными срезами, в которых
эпидермальные тяжи, прерываясь, углублялись в дерму.
С целью определения степени акантоза на основании получен-
ных морфометрических данных разработана визуально-аналоговая
шкала, позволяющая легко и объективно оценить степень пролифера-
ции эпидермальных тяжей вглубь дермы (рис. 1.2).
Степень I – акантоз слабой степени выраженности – пролифера-
ция эпидермальных тяжей ограничена ½ поля зрения микроскопа при
суммарном увеличении х100.
Степень II – умеренно выраженный акантоз – углубление эпи-
дермальных тяжей в подлежащую дерму более чем на ½ поля зрения
микроскопа при суммарном увеличении х100.
Степень III – выраженная степень акантоза – эпидермальные тя-
жи выходят за поле зрения микроскопа при увеличении х100.