Упрощенная HTML-версия
61
щенный сухой, сертификат № 000718, паспорт серия 153, кон-
трольный № ОБТК 526, соответствует требованиям ФС 42-3302-
96) без выделения лимфоцитов. Гепаринизированную кровь
(25ЕД гепарина на 1 мл крови) культивировали в круглодонных
иммунологических планшетах, в полной ростовой среде (ПРС)
(среда 199, содержащая 10% эмбриональной телячьей сыворотки,
L-глютамин (2мМ), HEPES (10мМ), гентамицина сульфат 50
мкг/мл) – контрольные образцы крови. Опытные образцы крови
культивировали в ПРС, содержащей ФГА (0,06мл) и ППД-
туберкулин (0,06мл) в 6 разведениях (50; 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,55
мкг/мл) в течение 120 часов. За 18 часов до окончания культиви-
рования в культуры клеток (контрольную и опытную) вносили по
1 мкCi ³Hı-тимидина. По окончании культивирования клетки
крови собирали полуавтоматическим сборщиком клеток на стек-
ловолоконные фильтры и высушивали. Подсчет радиоактивности
в имп/мин проводили автоматически в сцинтилляционной жид-
кости с помощью «Betta-2» камеры. Оценку уровня специфиче-
ского клеточного ответа проводили по определению индекса
стимуляции. Установлено, что результат индекса стимуляции
лимфоцитов до 3,2 – отрицательный, более 3,2 – положительный
(свидетельствует о сенсибилизации организма МБТ). Из полу-
ченных контрольных культур и культур клеток с ППД-Л отбира-
ют супернатанты (надосадок) по 0,05 мл, объединяют в общий
контрольный (0,15мл) и общий опытный образец (0,20мл), кото-
рые в дальнейшем используют для количественного определения
гамма-интерферона спектрофотометрически с помощью ИФА с
использованием тест-систем, предназначенных для определения
гамма–интерферона в супернатантах (приоритетная справка 2011
110 673 от 21.03.11 «Способ оценки активности туберкулеза у де-
тей и подростков»). Оценку уровня ИФН-
проводят по опреде-
лению индекса стимуляции. При показателе индекса стимуляции
менее 7,0 диагностируют отсутствие активной туберкулезной
инфекции, при показателе индекса стимуляции более 7,0 диагно-
стируют активный туберкулезный процесс.
Для определения диагностического критерия инфицирован-
ности микобактериями туберкулеза, активности туберкулезного
процесса и оценки эффективности специфической терапии, про-