Упрощенная HTML-версия
95
2. Метод распределения (по Гольду и его модификации). Из
определенного объема транспортной среды, после предвари-
тельного перемешивания (с целью равномерного распределе-
ния микробов во всем объеме), делают посев в первый сектор
чашки Петри и тщательно растирают материал петлей. После
чего петлю прожигают и из первого "грязного" сектора вы-
полняют три линейных штриха во второй сектор. Затем также
в третий и четвертый. Установлено, что при переходе к каж-
дому последующему сектору концентрация бактерий падает
на два порядка (поэтому при расчете используют множитель
10
2
для первого сектора, 10
4
– для второго и т.д.).
Например, при получении 15 колоний в третьем секторе кон-
центрация жизнеспособных бактерий в исследуемом объеме ма-
териала составит 15х10
6
КОЕ.
Независимо от методики, чашки Петри с анаэробным гемага-
ром культивируют в анаэростате или газбоксе при температуре
37°С до 7-10 дней, хотя большая часть анаэробов дает хороший
рост колоний уже на 3-4 день. При макроскопическом и микро-
скопическом изучении выросших колоний проводят сопоставле-
ние морфологии самих бактерий и колоний, которые они форми-
руют, при выращивании в анаэростате и полученных на 5% кро-
вяном агаре в аэробных условиях.
Принципиальное значение для дальнейшей идентификации
имеет проведение теста на наличие каталазы: материал колонии
смешивают на предметом стекле с каплей 0,5% перекиси водоро-
да – активное образование пузырьков газа свидетельствует о
наличии у данного микроба фермента каталазы, что обычно ха-
рактерно для факультативно-анаэробных бактерий. Основные ви-
ды облигатно-анаэробных бактерий каталазу не продуцируют.
II этап бактериологического метода –
выделение чистой культуры
Выполняется на жидких (тиогликолевая среда, среда Китта-
Тароци, сердечно-мозговой бульон) или полужидких средах
(с добавлением 0,5% агар-агара). Материал из изолированной ко-
лонии переносят в пробирку с одной из указанных сред, которые
затем желательно поместить в анаэростат. Чистые культуры по-
лучают через 3-5 дней культивирования при температуре 37° С.