Упрощенная HTML-версия
11
РНК. В их жизненных циклах отсутствует промежуточная фаза
превращения в ДНК. При выявлении РНК необходимо в первую
очередь перевести ее в форму ДНК. Для этого используют фер-
мент обратную транскриптазу, который выделяют из двух раз-
личных вирусов:
Аvian myeloblastosis virus
и
Moloney murine leu-
kemia virus.
Детекция.
Для правильной оценки результатов ПЦР важно
понимать, что данный метод не является количественным. Теоре-
тически продукты амплификации единичных молекул ДНК-
мишени могут быть обнаружены с помощью электрофореза уже
после 30-35 циклов.
Методы визуализации результатов амплификации
•
Метод горизонтального электрофореза
•
Метод вертикального электрофореза
•
Метод гибридизационных зондов
Проблема контаминации. Контаминация – попадание из
внешней среды в реакционную смесь специфических и неспеци-
фических молекул ДНК, способных служить мишенями в реак-
ции амплификации и давать ложноположительные или ложноот-
рицательные результаты.
Иммунноферментный анализ
Метод иммуноферментного анализа (ИФА) является одним
из наиболее активно развивающихся направлений лабораторной
диагностики. В основе анализа лежит иммунная реакция антигена
с антителом. Высокая специфичность и чувствительность, ин-
формативность и широкая доступность, возможность использо-
вания в качестве экспресс-анализа сделали гормонодиагностику
одними из важнейших методов обследования при фактически
любых заболеваниях. Метод иммуноферментного анализа (ИФА)
был предложен в начале 70-х годов тремя группами исследовате-
лей: Engvall и Perlmann в Швеции, van Weemen и Schuur в Нидер-
ландах и Rubenstein с сотр. в США. К концу ХХ века этот метод