Упрощенная HTML-версия
40
Классическая теория светорассеяния, разработанная Релеем,
рассматривает случай, когда размер рассеивающей частицы мал
по сравнению с длиной волны света, составляя 1/10 ее или мень-
ше. Для фиолетового света с длиной волны 400 нм это составляет
40 нм, а для красного – с длиной волны 700 нм размер релеевской
частицы не должен превышать 70 нм. Для сравнения: наиболь-
ший диаметр молекулы альбумина 8 нм, иммуноглобулина – 20
нм, а длина молекулы фибриногена – 50 нм.
Судить о мутности
раствора можно двумя способами: по количеству рассеянного
света и по количеству прошедшего; первый способ называется
нефелометрией
, второй –
турбидиметрией
. Каждый из этих спо-
собов имеет свои недостатки и преимущества. Нефелометрия
точнее и надежнее, так как позволяет зафиксировать даже не-
большое количество взвешенных частиц. При этом происходит
заметное возрастание сигнала, который в широких пределах про-
порционален количеству взвешенных частиц. Если же измерение
проводят турбидиметрическим методом, то количество белка
должно быть таким, чтобы рассеялось не менее 10–20% света,
иначе измерение будет недостоверным. Кроме того, не известен
физический закон, связывающий количество света, прошедшего
через мутный раствор, и число частиц. Поэтому калибровочные
графики всегда сугубо эмпиричны и трудно добиться хорошей
воспроизводимости. Зато турбидиметрические методы не требу-
ют специального прибора, измерение можно проводить на любом
фотометре или спектрофотометре.
При нефелометрии абсолютное количество рассеянного света
не имеет большого значения, так как чувствительность прибора
(нефелометра или флюориметра) обычно велика. В связи с этим,
что надо измерить количество светорассеивающих частиц безот-
носительно их формы и размера, удобно работать в красной об-
ласти спектра: длина волны больше, а спектр частиц, которые ве-
дут себя как релеевские, шире.
При выполнении турбидиметрического измерения, очень
важно увеличить долю рассеянного света, которая, согласно тео-
рии Релея, обратно пропорциональна четвертой степени длины
волны, т. е. в фиолетовой области значительно больше, чем в
красной. Поэтому выбирают светофильтр самой короткой длины