Упрощенная HTML-версия
184
Лабораторная работа № 1:
«И
ССЛЕДОВАНИЕ ПРОДУКТОВ МЕТАБОЛИЗМА
СУЛЬФАНИЛАМИДОВ В МОЧЕ
»
Сульфаниламиды в организме подвергаются конъюгации пу-
тем ацетилирования. По выделению свободной и ацетилирован-
ной форм сульфадимезина в моче можно оценить интенсивность
метаболизма ксенобиотиков.
Метод основан
на способности диазотированного сульфа-
ниламида при взаимодействии с ацетилированной Н-кислотой
(1,6-аминооксинафталин-3,5-дисульфокислота)
образовывать
комплекс розового цвета, интенсивность которого пропорцио-
нальна концентрации сульфаниламида. Содержание свободной и
ацетилированной форм сульфаниламидов в моче устанавливают
после гидролиза проб с соляной кислотой, в ходе которого проис-
ходит образование свободной форм сульфаниламида из ацетили-
рованной.
Этапы исследования
1. В две пробирки (одна для определения общего, а другая –
свободного сульфадимезина вносят по 1 мл мочи (разведен-
ной в 20 раз) и по 0,25 мл 10 % раствора соляной кислоты.
2. В первую пробирку (для определения общего сульфадимези-
на) закрывают пробкой и ставят в кипящую водяную баню на
15 минут для проведения гидролиза. Затем пробу охлаждают.
3. В обе пробирки приливают по 2 капли 0,5 % раствора нитри-
та натрия, тщательно перемешивают содержимое и оставля-
ют стоять 10 минут. Затем добавляют во все пробы по 1,5 мл
насыщенного раствора ацетата натрия, закрывают пробирки
пробками и энергично встряхивают несколько раз.
4. В обе пробирки добавляют по 0,25 мл 0,5 % раствора ацети-
лированной Н-кислоты. Вновь перемешивают содержимое и
оставляют стоять пробы на 15 минут для развития окрашива-
ния.
5. Измеряют экстинкцию опытных проб на КФК при 440 нм в
кюветах с толщиной слоя 5 мм и по калибровочному графику