Упрощенная HTML-версия
137
3.
Синтез цепей ДНК (элонгация).
Комплементарный синтез
цепей ДНК начинается с участков присоединения праймеров.
Материалом служат дезоксинуклеотидтрифосфаты. Процесс
катализирует Tag-полимераза при температуре 70–72
о
С.
Время синтеза 20–40 сек.
Эти этапы повторяются многократно в программируемом
термостате – амплификаторе и позволяют получить огромное ко-
личество копий нужного фрагмента ДНК. В результате 20 циклов
ДНК амплифицируется более чем в миллион раз. В качестве ис-
точника матричной ДНК может быть использован любой матери-
ал, сохранивший в своем составе полный набор фрагментов ис-
ходных молекул ДНК: высушенные на фильтровальной бумаге
пятна крови, ворсины хориона, смывы из полости рта, луковицы
корней волос, культуры клеток, соскобы с цитогенетических пре-
паратов. Существуют различные модификации ПЦР: мульти-
плексная ПЦР – одновременная амплификация нескольких
участков матричной ДНК, метод PRINS – реакция амплификации
на хромосомных препаратах и т. д.
В настоящее время метод ПЦР используется:
-
с целью диагностики возбудителей заболеваний, особенно
трудно культивируемых, некультивируемых, требующих
сложных питательных сред микроорганизмов, внутриклеточ-
ных паразитов, вирусных инфекций (вирусный гепатит С и В,
ВИЧ),
-
в исследовании генома (определение места локализации
предполагаемых мутаций, изучение других специфических
особенностей ДНК), в молекулярной диагностике наслед-
ственных болезней.
Схема ПЦР
Участок ДНК, который
необходимо амплифицировать
Нить 1 3
Нить 2 5
Цикл 1