Упрощенная HTML-версия
118
гидразон пировиноградной кислоты, интенсивность окраски ко-
торого пропорциональна количеству образовавшейся ПВК.
Ход работы.
К 0,5 мл субстратного раствора (альфа-
кетоглутаровая кислота и аланин) добавляют 0,1 мл сыворотки
крови и смесь инкубируют при 37
о
С 30 минут. Затем добавляют
0,5 мл 2,4-динитрофенилгидразинового реактива и 5 мл 0,4 н ед-
кого натра, тщательно перемешивают раствор и оставляют для
развития окраски на 10 минут при комнатной температуре.
Измерение ведут на фотоколориметре при длине волны 500–
560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.
Расчет.
Расчет активности фермента проводят по калибро-
вочному графику (стандарт – пировиноградная кислота).
После определения по калибровочной кривой содержания
пировиноградной кислоты (в мг), необходимо сделать перерасчет
активности фермента в ммоль ПВК, образующейся под влиянием
1 литра сыворотки крови за 1 час при 37
С по следующей фор-
муле:
С × 2 × 10 000
Х= –––––––––––––––, где
88
Х – активность АлАТ в ммоль ПВК на 1 л сыворотки крови за 1
час инкубации при 37
С;
С – содержание ПВК в мг, найденное по калибровочному графи-
ку;
88 –масса 1 ммоля ПВК в мг;
2 – коэффициент пересчета на 1 час инкубации.
Норма
: 0,1–0,68 ммоль/ч
л
Клиническое значение определения активности АлАТ
в сыворотке крови
Наиболее высокая активность АлАТ обнаруживается в пече-
ни, поджелудочной железе, сердце, скелетной мускулатуре. В пе-
чени активность АлАТ в несколько тысяч раз выше, чем в сыво-
ротке крови. Повышение активности аминотрансфераз в сыво-
ротке крови отмечено при целом ряде заболеваний и особенно