Упрощенная HTML-версия
Лабораторная работа №1:
«КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БИЛИРУБИНА В
СЫВОРОТКЕ КРОВИ»
Принцип метода.
Метод основан на колориметрическом определении интенсивности
окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в
малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид непосредственно реагирует с диазореакти-
вом. Неконъюгированный билирубин (связанный с белками билирубин) реагирует с
диазореактивом только после диссоциации белкового комплекса, которая достигается
прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.
Ход работы.
В три пробирки вносят растворы согласно таблице 19 и тщательно
перемешивают.
Для определения общего билирубина пробы оставляют стоять на 20 минут для
развития окраски, а КБ на 5-10 минут после добавления диазореактива.
Таблица 19
Определение билирубина в сыворотке крови
Пробирки
1
2
3
№
Растворы
Общий
билирубин
Конъюгированный
билирубин (КБ)
Конт-
роль
1. Сыворотка (мл)
0,5
0,5
0,5
2. Кофеиновый р-в (мл)
1,75
-
1,75
3. 0,9% р-р NaCl (мл)
-
1,75
0,25
4. Диазореактив (мл)
0,25
0,25
-
По истечении указанного времени фотометрируют каждую пробу против воды на
КФК при длине волны 520-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см.
Из показателей, полученных при колориметрировании общего и конъюгированного
билирубина вычисляют показатель контроля.
Расчет.
Расчет проводят по калибровочному графику. Находят содержание общего
билирубина и КБ. Для определения уровня НБ вычитают из показателя общего его
содержания показатель КБ.
Клиническое значение определения билирубина
в сыворотке крови
В норме концентрация общего билирубина в сыворотке крови составляет 8-20
мкмоль/л. Из этого количества 75% приходится на долю неконъюгирпованного (свободного)
билирубина (6-15 мкмоль/л) и 25%-на долю конъюгированного (связанного) билирубина (2-5
мкмоль/л). Исследование содержания билирубина проводится в клинике для диф-
ференциальной диагностики желтух. Желтушная окраска кожных покровов проявляется при
уровне билирубина в крови выше 27 мкмоль/л. При надпеченочных желтухах гемолитическая
анемия, желтуха новорожденных и др.) увеличивается содержание свободного билирубина в
крови, при печеночных желтухах, возникающих вследствие поражения собственно клеток
печени, повышается концентрация связанного билирубина в крови, а при подпеченочных
желтухах, к которым относится механическая, наблюдается возрастаниеуровня как
свободного, так и в .большей степени связанного билирубина.