Упрощенная HTML-версия
• затем следует вынуть полоску
• если нет необходимости дальнейшего измерения, выключите прибор
прикосновением на переключатель ON/OFF.
Количественное определение глюкозы в крови
Для количественного определения глюкозы в крови используются следующие методы.
1. Редуктометрические – основаны на свойстве сахаров восстанавливать соли
тяжелых металлов в щелочной среде (титрометрический метод Хагедорна-Йенсена).
Недостаток этих методов состоит в том, что они неспецифичны, тат как присутствующие в
крови редуцирующие вещества, не являющиеся углеводами, также обладают
восстанавливающими свойствами, и полученные результаты включают всю сумму
восстанавливающих соединений крови. В связи с этим количество «сахара» в крови
получается значительно выше истинного количества глюкозы, однако этот метод сохраняет
свое клиническое значение, поскольку разность между «кажущимся» сахаром крови и
«истинной» глюкозой (так называемая остаточная редукция) у одного и того же лица
является величиной постоянной.
2. Колориметрические – основаны на определении степени интенсивности
окраски соединений, образующихся при взаимодействии глюкозы с определенным
веществом. К ним относится орто-толуидиновый метод. Метод специфичен и точен.
3. Энзиматические – основаны на действии фермента глюкозооксидазы,
окисляющей глюкозу до глюконовой кислоты кислородом воздуха. К ним относится
глюкозооксидазный метод. Этот метод специфичен и широко применяется в клинико-
диагностических лабораториях.
Лабораторная работа №2:
«ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ
ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ»
Принцип метода.
Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется
кислородом воздуха с образованием в ходе реакции перекиси водорода. Образовавшийся
пероксид водорода в свою очередь окисляет о – толидин с образованием окрашенного
соединения, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию глюкозы.
Ход работы.
В две пробирки наливают по 1,8 мл раствора антикоагулянта, затем в
одну из них вносят 0,2 мл исследуемой крови, а в другую - 0,2 мл стандартного раствора
глюкозы.
Содержимое пробирок тщательно перемешивают и фильтруют. Для исследования
берут по 0,5 мл фильтрата и переносят в чистые пробирки, добавляют по 4,5 мл энзимо –
хромогенного реактива (глюкозооксидаза, пероксидаза, о – толидин) .
Пробы тщательно перемешивают и инкубируют в течение 25 минут при 18 – 25° С.
Затем их помещают в кипящую водяную баню на 8 минут. После охлаждения до комнатной
температуры определяют оптическую плотность опытной и стандартной проб на КФК против
дистиллированной воды при длине волны света 620 нм, в кюветах толщиной 5 или 10 мм.
Расчет.
Расчет содержания глюкозы проводится по формуле:
где:
Соп – концентрация глюкозы в исследуемой крови, ммоль/л;
Сст – концентрация глюкозы в стандартной пробе, ммоль/л;
Доп – оптическая плотность опытной пробы;
Дст – оптическая плотность стандартной пробы.