Упрощенная HTML-версия
Тема занятия:
«БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ,
ПРИМЕНЯЕМЫЕ В ФАРМАЦИИ»
Вопросы для самоподготовки
1. Биохимические методы, используемые в стандартизации и контроле качества
лекарств.
2. Иммобилизованные ферменты. Иммуноферментный анализ.
3. Основы биодоступности лекарств веществ в организме. Липосомы как носители
лекарств.
4. Основы биотехнологии лекарственных веществ. Генная инженерия.
Лабораторная работа №1:
«ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОДУКТОВ МЕТАБОЛИЗМА СУЛЬФАНИЛАМИДОВ В
МОЧЕ»
Сульфаниламиды в организме подвергаются конъюгации путем ацетилирования. По
выделению свободной и ацетилированной форм сульфадимезина в моче можно оценить
интенсивность метаболизма ксенобиотиков.
Метод основан
на способности диазотированного сульфаниламида при
взаимодействии
с
ацетилированной
Н-кислотой
(1,6-аминооксинафталин-3,5-
дисульфокислота) образовывать комплекс розового цвета, интенсивность которого
пропорциональна концентрации сульфаниламида. Содержание свободной и ацетилированной
форм сульфаниламидов в моче устанавливают после гидролиза проб с соляной кислотой, в
ходе которого происходит образование свободной формы сульфаниламида из
ацетилированной.
Этапы исследования
1. В две пробирки (одна для определения общего, а другая - свободного
сульфадимезина вносят по 1 мл мочи (разведенной в 20 раз) и по 0,25 мл 10 % раствора
соляной кислоты.
2. В первую пробирку (для определения общего сульфадимезина) закрывают
пробкой и ставят в кипящую водяную баню на 15 минут для проведения гидролиза. Затем
пробу охлаждают.
3. В обе пробирки приливают по 2 капли 0,5 % раствора нитрита натрия,
тщательно перемешивают содержимое и оставляют стоять 10 минут. Затем добавляют во все
пробы по 1,5 мл насыщенного раствора ацетата натрия, закрывают пробирки пробками и
энергично встряхивают несколько раз.
4. В обе пробирки добавляют по 0,25 мл 0,5 % раствора ацетилированной Н-
кислоты. Вновь перемешивают содержимое и оставляют стоять пробы на 15 минут для
развития окрашивания.
5. Измеряют экстинкцию опытных проб на КФК при 440 нм в кюветах с
толщиной слоя 5 мм и по калибровочному графику находят содержание сульфадимезина мкг
в первой и второй пробах. Затем определяют количество ацетилированного сульфадимезина
по формуле:
Х = (С2 – С1) * 20,
где:
Х – содержание ацетилированного сульфадимезина в моче в мкг/мл,