Упрощенная HTML-версия
Опытная проба
Контрольная проба
№
Компоненты
Объем
(мл)
№
Компоненты
Объем
(мл)
1.
2.
3.
4.
5.
Трис-HCl буфер
Хлорид магния
НАДФ Н
Взвесь микросом
Анилин
0,4
0,4
0,2
0,1
0,11
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Трис-HCl буфер
Хлорид магния
Взвесь микросом
ТХУ
Анилин
НАДФ Н
0,4
0,4
0,1
0,5
0,11
0,2
Обе пробирки помещают на 20 мин в водяную баню при 370С. В опытной пробе
реакцию останавливают, приливая 0,5 мл ТХУ. Далее обе пробы центрифугируют 10 мин при
3000 об/мин.
Из каждой пробы отбирают по 1 мл надосадочной жидкости и переносят в две другие
пробирки. Затем приливают к ним по 0,5 мл карбоната натрия и по 1,5 мл раствора фенола.
Перемешивают содержимое встряхиванием.
Для развития окраски пробирки помещают на 30 мин в водяную баню при 370С.
Затем измеряют экстинцию опытной пробы против контрольной на фотоколориметре
при 630 нм.
Содержание 4-аминофенола в пробах определяют по калибровочному графику.
Расчет
проводят по формуле
где:
Х – гидроксилазная активность, нмоль/мин;
А – содержание 4-аминофенола в пробе, найденное по калибровочному графику;
V – объем пробы, равный 1,71 мл;
20 – время инкубации, мин.
Практическое значение работы.
Биотрансформация ксенобиотиков осуществляется
с участием ферментов, содержащихся в тканях и жидкостях организма. Их состав определяет
специфичность превращения любого чужеродного соединения. Метаболизм ксенобиотиков
зависит от пути поступления их в организм. В пищеварительном тракте возможен
гидролитический распад чужеродных веществ, в биологических жидкостях они подвергаются
и некоторым другим превращениям (оксидоредукции, конъюгации), а в клетках происходят
самые разнообразные реакции их биотрансформации.
Наиболее активно ферментативные превращения ксенобиотиков осуществляются в
клетках печени. Среди них следует отметить реакции окисления веществ, осуществляемые
монооксигеназной ферментативной системой мембран эндоплазматической сети (микросом)
печени. Скорость реакции гидроксилирования изменяется при действии многих внешних
факторов (радиации, гипероксии, гипоксии, интоксикации четырех хлористым углеродом и
т.д.), под влиянием ряда регуляторов (витаминов, гормонов).
Типовые вопросы компьютерного контроля
1. Какие ферменты участвуют в метаболизме лекарственных веществ?
1) аспартатаминотрансфераза
2) карбоксиэстераза
3) аминооксидаза
4) сукцинатдегидрогеназа
5) пероксидаза