Упрощенная HTML-версия
хроматографическую очистку методом ТСХ. Для этого на хроматографическую
пластинку на стартовую линию, наносят в виде сплошной полосы шириной 1 см
всю аликвоту экстракта для количественного определения к хроматографируют в
системе 2. По окончании хроматографирования в УФ-свете отмечают зону
соединения с соответствующим R
f
, параллельно метчикам, снимают слой сорбента,
содержащего соединение скальпелем в пробирку. Элюирование проводят 10 мл
раствора 25% аммиака в этаноле (1:1) элюат отделяют фильтрованием через
стеклянный фильтр № 4, упаривают досуха в токе холодного воздуха. Сухой
остаток растворяют в 5 мл 0,1 М. раствора HCl, затем добавляют 4 мл 0,01 М. НCl.
В случае отсутствия других веществ основного характера вторую часть
гептанового извлечения (кровь, моча) реэкстрагируют 5 мл 0,1 М. HCl, а затем 4 мл
0,01 М. НCl. Солянокислые растворы объединяют.
К объединенному солянокислому раствору добавляют 12 мл ацетатного
буферного раствора (рН 3,5), 2 мл насыщенного раствора метилоранжа и 5 мл
хлороформа. Полученная смесь взбалтывается в делительной воронке – при
наличии производных фенотиазина хлороформный слой окрашивается в желтый
цвет (гелиантаты производных фенотиазина, извлекаемые хлороформом).
Хлороформный слой отделяется и определяется оптическая плотность окрашенного
раствора (фотоэлектроколориметр ФЭК-56 и др., кювета 10 мм, светофильтр синий
с максимумом пропускания при 400 нм).
Для построения калибровочной кривой готовят стандартные растворы в 0,01
М. НСl производных фенотиазина с содержанием 1
,
2-10 мкг/мл производных:
фенотиазина и исследуют их вышеприведенной процедурой. На основании
результатов определения оптической плотности строится калибровочный график.
Вышеприведенным методом изолируется до 60% производных фенотиазина из
крови и до 80% из мочи.
Количественное определение аминазина и его метаболитов
1.Фотоколориметрическое
определение
основано
на
реакции
с
концентрированной серной кислотой. Фотометрирование проводят при λ = 508 нм;
эталон сравнения – контрольный опыт. Расчет содержания аминазина и его
метаболитов производится по калибровочному графику.
2.Спектрофотометрическое
обнаружение.
Ультрафиолетовый
спектр