Упрощенная HTML-версия
В основе качественных и количественных определений, осуществляемых в ЖХ,
лежат те же принципы, что и в ГХ. Качественные определения проводят по
характеристикам удерживания или одним из следующих методов – химическим
микроанализом по характерным окраскам продуктов реакции со специально
добавленными веществами; по УФ, видимым, ИК или флуоресцентным спектрам; по
масс- или ЯМР спектрам.
В соответствии с
механизмом взаимодействия
между компонентами разделяемой
смеси веществ и неподвижной фазы ЖХ
подразделяют
на жидкостно-адсорбционную
хроматографию (
ЖАХ
), аффинную, ионообменную и гель-хроматографию.
В основе ЖАХ
лежит различие в сорбционной способности компонентов раствора
на твердой НФ с высокоразвитой поверхностью. С ее помощью разделяют вещества,
которые невозможно анализировать ГХ, т.е. термически нестойкие, летучие, очень
полярные.
В зависимости от аппаратурного оформления
ЖАХ делится на: колоночную и
ТСХ.
В зависимости от давления, при котором она проводится
, выделяют 2 способа
ее осуществления:
1.
При обычном давлении – классический вариант.
2.
При повышенном давлении – высокоэффективная жидкостная хроматография
(
ВЭЖХ)
.
На рубеже 60 -70 годов появился метод ВЭЖХ, в котором используются
оптимизированные конструкции колонок, растворы в которые подаются под давлением с
помощью специальных насосов для высокоточной и малопульсирующей прокачки
жидких потоков. На выходе приборов используются различные эффективные
селективные детекторы, основанные на поглощении в УФ -области, на флуоресценции,
электрохимических методах. В последнее время постоянно улучшающаяся конструкция
колонок позволила использовать сложные газофазные детекторы, такие, как масс-
спектрометры и плазменные ионизационные анализаторы. Интенсивно развивается
капиллярная ВЭЖХ.
Если разделение проводят на полярном адсорбенте и с неполярной ПФ, то фазы
называют
нормальными
. Если же разделение проводят на неполярной НФ и с полярной
ПФ, то фазы –
обращенные
. Почти 90 % всех анализов методом ВЭЖХ выполняют на
обращено-фазовых сорбентах
на основе силикагеля.
Неподвижные фазы,
используемые в жидкостной хроматографии, должны быть:
механически и химически устойчивыми в условиях анализа,
обеспечивать требуемую селективность и эффективность,
не должны смешиваться с подвижной фазой.
В качестве адсорбентов применяют тонкодисперсные пористые материалы с удельной
поверхностью более 50 м
2
• г
-1
.Они могут быть полярными и неполярными, а потому будут
проявлять неодинаковую селективность по отношению к разделяемым соединениям.
Для разделения разных молекул НФ должна обладать хотя бы одним из
следующих свойств:
способностью к физическому сорбированию вещества, находящегося в
подвижной фазе;
способностью к химическому сорбированию вещества подвижной фазы;
способностью к растворению разделяемых веществ;
наличием пористой структуры, способной удерживать одни вещества и не
задерживать другие в зависимости от их размеров или формы.
Полярные адсорбенты
- это SiO
2
, A1
2
O
3
, оксиды металлов, флорисил и др.
Неполярные
– диатолит, графитированный углерод.
Подвижные фазы
оказывают большое влияние на селективность разделения,
эффективность колонки и скорость движения хроматографической полосы.