Упрощенная HTML-версия
5
5
Исследование полиморфизма генов изоферментов цитохрома Р450, «медленных»
мутантных аллелей (
СYP 2D6*3*4; CYP2C19*2*3)
проводили с помощью полимеразной
цепной реакции (ПДРФ анализ).
Для определения полиморфных вариантов гена CYP2D6 использовали ПЦР с
дальнейшей рестрикцией амликонов эндонуклеазами рестрикции: MspI – для
генотипирования полиморфного локуса аллель *3 и Bst2U – для генотипирования
полиморфного локуса аллель *4*6.
Для определения полиморфных вариантов гена CYP2C19 исполизовали ПЦР с
дальнейшей рестрикцией ампликонов эндонуклеазами рестрикции MspI для
генотипирования полиморфного локуса аллель*2 и BamHI – для генотипирования
полиморфного локуса аллель*3.
При гидролизе амплификационного фрагмента гена CYP2D6 эндонуклеазой
рестрикции MspI выявлялись фрагменты размером 193 п.н., 50 п.н. Фрагмент 193 п.н.
указывал на присутствие аллеля *1 гена CYP2D6. При наличии аллеля *3 определялись три
фрагмента размером 168 п.н., 25 п.н. и 50 п.н..
При гидролизе амплификационного фрагмента гена CYP2D6 эндонуклеазой
рестрикции Bst2U выявлялись фрагменты размером 320 п.н 18 п.н. Фрагмент 320 п.н.
указывал на присутствие аллеля*4. При наличии аллеля *1 два фрагмента 161п.н. и 159п.н.
Фрагмент 161п.н. указывал на присутствие аллеля *1. При наличии аллеля *6 – три
фрагмента 161п.н., 140п.н.,19п.н. Фрагмент 161п.н. указывал на присутствие аллеля*6.
При гидролизе амплификационного фрагмента гена CYP2C19 эндонуклеазой
рестрикции MspI выявлялись фрагменты 235п.н. и 21п.н при наличии аллеля*2. .При
наличии аллеля*1 три фрагмента 123п.н.112п.н 21п.н. Фрагмент 123п.н. указывал на
присутствие аллеля *1.
При гидролизе амплификационного фрагмента гена CYP2C19 эндонуклеазой
рестрикции BamHI выявлялись фрагменты 188п.н., 19п.н. при наличии аллеля*3. При
наличии аллеля *1 три фрагмента 144п.н. 44 п.н. 19п.н.. Фрагмент 144п.н. указывал на
присутствие аллеля*1.
Анализ рестрикционных смесей проводили с помощью электрофореза в 3%-м
агарозном геле с бромистым этидием.
Результаты исследований были cтатистически обработаны при помощи углового
преобразования Фишера и ч
2
. Статистически достоверными считали различия при р<0,05.