Упрощенная HTML-версия
40
2.3.2. Определение полиморфизма генов провоспалительных цитокинов
и рецепторов макрофагов
Молекулярно-генетические исследования выполнены в лаборатории
молекулярных основ генетики животных ГУ НИИ Цитологии и генетики
Сибирского отделения Российской Академии Наук (Сибирский научный
центр, г. Новосибирск, директор -
акад. РАН, д.б.н. Н.А. Колчанов) при
консультации заведующей лабораторией молекулярных основ генетики
животных ИЦиГ СО РАН,
к.б.н.,
профессора А.Г. Ромащенко.
Популяционный анализ.
Исследование выполнено с использованием
образцов ДНК, выделенных из венозной крови больных ХГП и пациентов без
клинически выраженных признаков воспаления в тканях пародонта
случайной популяционной выборки. Сразу после получения кровь помещали
в морозильную камеру и хранили её при t = − (18-20)
о
С вплоть до момента
транспортировки. Транспортировку биологического материала к месту
исследования осуществляли в специальных центрифужных пробирках с
антикоагулянтом, объёмом 10 мл, помещённых в специальный
термоконтейнер. В дальнейшем кровь подвергалась генотипированию, после
чего проводился анализ делеционно/инсерционного полиморфизма
определяемых генов по полиморфным сайтам.
Распределение нормальных и полиморфных вариантов генов TNF-α G(-
308)→A; IL-1β C(-511)→T, IL-2 T(-330)→G; IL-6 G(-174)→C; IL-8 A(-
251)→T, а также рецепторов CD14 C(-260)→T, TLR-2 Arg(-753)→Gly, TLR-4
Asp(-299)→Gly и TLR-6 Ser(-249)→Pro
проводили с использованием
GenoType
®
PRT-теста («Hain Diagnostica», Германия), основанного на DNA-
STRIP-технологии, позволяющей осуществлять комбинированный анализ
основного состава и сочетание аллелей в определённых локусах генов
интерлейкинов человека с помощью молекулярно-генетических методов [67].
Праймеры подобраны с помощью программы Primer-express 3.0.
Специфичность праймеров проверена в программе NCBI для Macintosh [134].