Упрощенная HTML-версия
67
амплификационного фрагмента гена ИЛ-1β эндонуклеазой рестрикции Ama87I
выявлялись фрагменты размером 520 п.о., 80 п.о. и 440 п.о. Фрагмент 520 п.о.
указывал на присутствие аллеля -511Т ИЛ-1β. При наличии аллеля С
определялись два фрагмента размером 80 п.о. и 440 п.о. Анализ
рестрикционных смесей проводился с помощью электрофореза в 8%
полиакриламидном
геле
в
1хТВЕ
буфере.
Фрагменты
ДНК
идентифицировались в проходящем ультрафиолетовом свете после
окрашивания бромистым этидием.
Таблица 6
Структура олигонуклеотидных праймеров
Ген
Мутация
Прямой праймер (F)
Обратный праймер
(R)
ИЛ-1β
(-511) С→Т AAAGAGGCAAAGGAGG
GTGTTC
GGGTACAATGAAGGG
CCAATAG
ИЛ-1RN
Интрон 2
86 п.о.VNTR
CCCACTCATGGCCTTGT
TC
GGCTCAATGGGTACC
ACAТC
Исследование
полиморфизма
ИЛ-1RN
проводилось
с
помощью
полимеразной цепной реакции с праймерами, фланкирующими полиморфный
регион в пределах второго интрона, в котором находилось вариабельное
количество тандемных повторов – 86 п.о. В результате амплификации
определялись фрагменты ДНК размерами, указанными на рис. 6.
Нормальный, наиболее часто встречающийся вариант гена ИЛ-1RN, содержал
четыре тандемных повтора; наиболее значимый из полиморфных вариантов
аллель ИЛ-1RN*2 – два тандемных повтора; остальные варианты этого гена
встречались крайне редко (менее чем у 1 % популяции) и в данной работе не
рассматривались.
Для краткого обозначения аллелей были приняты следующие сокращения:
нормальный, не несущий мутацию аллель, обозначали цифрой 1; полиморфный
– цифрой 2; ген, гомозиготный по нормальному варианту аллеля, – «1/1»; ген,