Стр. 68 - 2

66
Сразу после взятия крови у пациента её помещали в морозильную камеру и
хранили при температуре (-18-20)°С.
Транспортировка биологического материала для исследования
осуществлялась в специальных центрифужных пробирках объемом 10 мл,
помещённых в специальный термоконтейнер. В дальнейшем кровь
подвергалась генотипированию, после чего проводился анализ полиморфизма
определяемых генов по полиморфным сайтам.
Исследование полиморфизма генов ИЛ-1β (-511) С→Т
и ИЛ-1RN (VNTR по 86 п.о. в интроне 2)
ДНК выделялась из лимфоцитов периферической крови методом
перхлоратной экстракции с этанольным осаждением [83]. Варианты гена,
несущие точечные замены нуклеотидов: ИЛ-1β (-511) в промоторном регионе
С→Т, определялись методом анализа полиморфизма длин рестрикционных
фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции-амплификации
специфических участков генома с использованием праймеров,
синтезированных в Институте химической биологии и фундаментальной
медицины СО РАМН (г. Новосибирск). Структуры праймеров и программа
амплификации приведены в табл. 6.
Анализ полиморфных локусов генов ИЛ-1β и ИЛ-1RN осуществлялся с
помощью метода полимеразной цепной реакции в стандартных условиях на
амплификаторе «Терцик» («ДНК-Технология», г. Москва) согласно
общепринятой методике исследования [44]. Амплификация проводилась в
буфере, содержавшем 10 мМ Трис-HCl (pH 8,9); 50 мМ KCl; 1,7 мМ MgCl;
0,05% Tween 20 с добавлением 0,2 мМ-раствора dNTP; 0,5 мкМ раствора
праймеров; 20 нг ДНК и 1,0 ед. акт. Taq-полимеразы. Реакционная смесь в
объеме 20 мкл покрывалась 40 мкл минерального масла.
Для генотипирования полиморфного локуса (-511) С→Т ИЛ-1β
использовался метод полимеразной цепной реакции с дальнейшей рестрикцией
ампликонов эндонуклеазой рестрикции Ama871. При гидролизе