Упрощенная HTML-версия
следующим расчетом числа выросших колоний на единицу ко
личества материала - КОЕ или CFU (колониеобразующая еди
ница). Существует два основных варианта количественного ис
следования.
1. Метод разведения в жидкой питательной среде, например,
в тиогликолевой или в сахарном бульоне. Готовят разведения ис
ходного объема материала в 10, 100, 1000 и т.д. раз, а затем де
лают посев на отдельные чашки Петри в количестве 0,1 мл и рав
номерно распределяют материал по поверхности анаэробного ге-
магара.
2. Метод распределения (по Гольду и его модификации). Из
определенного объема транспортной среды, после предваритель
ного перемешивания (с целью равномерного распределения мик
робов во всем объеме), делают посев в первый сектор чашки Пет
ри и тщательно растирают материал петлей. После чего петлю
прожигают и из первого "грязного" сектора выполняют три ли
нейных штриха во второй сектор. Затем также в третий и четвер
тый. Установлено, что при переходе к каждому последующему
сектору концентрация бактерий падает на два порядка (поэтому
при расчете используют множитель 102для первого сектора, 104-
для второго и т.д.).
Например, при получении 15 колоний в третьем секторе кон
центрация жизнеспособных бактерий в исследуемом объеме ма
териала составит 15x106КОЕ.
Независимо от методики, чашки Петри с анаэробным гемага-
ром культивируют в анаэростате или газбоксе при температуре
37°С до 7-10 дней, хотя большая часть анаэробов дает хороший
рост колоний уже на 3-4 день. При макроскопическом и микро
скопическом изучении выросших колоний проводят сопоставле
ние морфологии самих бактерий и колоний, которые они форми
руют, при выращивании в анаэростате и полученных на 5% кро
вяном агаре в аэробных условиях.
Принципиальное значение для дальнейшей идентификации
имеет проведение теста на наличие каталазы: материал колонии
смешивают на предметном стекле с каплей 0,5% перекиси водо
рода - активное образование пузырьков газа свидетельствует о
наличии у данного микроба фермента каталазы, что обычно ха
43