Упрощенная HTML-версия
9
первичные ready to use (готовые к использованию, без разведения) мышиные
моноклональные антитела к CD4 (клон - 1F6), CD8 (клон - 144B), CD138
(клон - MI15) («DAKO», Дания), CD20 (клон - L26), CD68 (клон - KP1)
(«Diagnostic Biosystems», США) и кроличьи поликлональные антитела к IgA,
IgG («DAKO», Дания). Ядра докрашивали гематоксилином Майера.
Биотинилированные антитела второго слоя и стрептавидин, меченный
пероксидазой, входили в систему визуализации KP-500 («Diagnostic
Biosystems», США). Определяли относительное количество позитивно
окрашенных клеток, подсчитывая при 400-кратном увеличении долю (в %)
положительно окрашенных клеток мононуклеарного воспалительного
инфильтрата в собственной пластинке слизистой оболочки желудка в 10
случайно выбранных полях зрения (не менее 1000 клеток). Подсчет CD138+,
IgA+, IgG+ клеток проводился в 1 мм
2
среза.
Просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли на
микроскопе Axioskop 40 с цифровой фотокамерой Axiocam MRc5 («Carl
Zeiss», Германия).
Генетический метод исследования (метод полимеразной цепной
реакции)
применяли для исследования полиморфизма следующих генов
интерлейкина-1β (IL-1β C+3953T, C-511T), рецепторного антагониста
интерлейкина-1 (IL-1RN VNTR во 2 интроне), фактора некроза опухолей-α
(TNF-α G-308A), интерлейкина-10 (IL-10 G-1082A) в лейкоцитах
периферической крови.
Для определения полиморфных локусов C+3953T, C-511T гена IL-1β и
VNTR-полиморфизма во 2 интроне гена IL-1RN использовали коммерческие
наборы,
производимые
Институтом
химической
биологии
и
фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск). Для определения
полиморфных локусов G-308A гена TNF-α и G-1082A гена IL-10
использовались наборы «SNP-экспресс» (НПФ «Литех», Москва). Этапы
выделения, амплификации ДНК, рестрикции и детекции продуктов
амплификации выполнялись в соответствии с требованиями, указываемыми
производителем. Этап амплификации выполнялся на термоциклере «Терцик»
(ДНК-технология, Москва). Исследование выполнено в лаборатории кафедры
патологической анатомии Омской государственной медицинской академии.
Статистические методы исследования.
Минимальный размер
выборки определялся по формуле F. Lopez-Jimenez с соавт. (Lopez-Jimenez
F. et. al., 1998) и составил 32 наблюдения. Для анализа достоверности
различий использовались критерии: хи-квадрат (χ2), Манна – Уитни (U),