Упрощенная HTML-версия
9
выявленной соматической патологии. Так, в группе сравнения химиопрофилактика
проведена у 97 (66%) детей, в основной группе у 21 (14,3%) ребенка. Сравниваемые группы
не имели различий по возрастно-половому составу, по соматической заболеваемости и в
целом по «фтизиатрической» структуре.
У всех детей проводили общепринятый комплекс клинико-лабораторных
исследований. Туберкулиновая чувствительность определялась с помощью пробы Манту с 2
ТЕ ППД-Л, оценка которой проводилась согласно Приказу МЗ РФ № 109 от 2003 года.
Для оценки иммунологической реактивности применяли методы определения уровня
иммуноглобулинов (Ig) G, А, М (по методу Manchini и др., 1970) и Ig Е (иммуноферментным
методом) в сыворотке крови; проводили оценку фагоцитарной активности нейтрофилов по
их способности поглощать инертные частицы латекса (по методическим рекомендациям
Б.В.Пинегина с соавт., 1987) и в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) спонтанном и
стимулированном, с определением коэффициента прироста (по методу B.H.Park et al, 1970);
определение функциональной активности Т-лимфоцитов в РБТЛ по спонтанному синтезу и
при стимуляции ФГА по E.Bloemence et al. (1989). Определение уровня специфического
клеточного ответа в модифицированной РБТЛ на туберкулин (аллерген туберкулезный
очищенный сухой, сертификат № 000718, паспорт серия 153, контрольный № ОБТК 526,
соответствует требованиям ФС 42-3302-96, далее читать как ППД-Л), которое проводили до
лечения и в динамике проводимого специфического лечения. Постановку РБТЛ проводили
по E.Bloemence et al. (1989) в модификации к.б.н. Ю.И.Пацула, с использованием
микрокультур цельной крови с ФГА и ППД-Л без выделения лимфоцитов. При этом важно,
что используется малый объем крови (200мкл), нет селективной потери Т-лимфоцитов и
других клеток крови. Данная реакция отличалась от общепринятых методов, поэтому
приводим описание модифицированной РБТЛ на ППД-Л. Гепаринизированную кровь (25ЕД
гепарина на 1 мл крови) культивировали в круглодонных иммунологических планшетах, в
полной ростовой среде (ПРС) (среда 199, содержащая 10% эмбриональной телячьей
сыворотки, L-глютамин (2мМ), HEPES (10мМ), гентамицина сульфат 50 мкг/мл) –
контрольные образцы крови. Опытные образцы крови (0,01мл) культивировали в ПРС,
содержащей ФГА (0,06мл) и ППД-Л (0,06мл) в 6 разведениях (50; 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,55
мкг/мл) в течение 120 часов. За 18 часов до окончания культивирования в культуры клеток
(контрольную и опытную) вносили по 1 мкCi ³Hı-тимидина. По окончании культивирования
клетки крови собирали полуавтоматическим сборщиком клеток на стекловолоконные
фильтры и высушивали. Подсчет радиоактивности в имп/мин проводили в
сцинтилляционной жидкости с помощью «Betta-2» камеры. Оценку уровня специфического
клеточного ответа проводили по определению индекса стимуляции.