Упрощенная HTML-версия
синтезированными последовательностями нуклеотидов (Руководство по краткосрочным
тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ, 1989).
6.8.3. Процедура тестирования
6.8.3.1. Клеточные культуры
Можно использовать первичные фибробласты человека, лимфоциты периферической
крови человека, первичные гепато-циты крыс и др.
6.8.3.2. Метаболическая активация
В
качестве экзогенной метаболической активации используется фракция S9 печени
крыс, предобработанных соволом (300 мг/кг, однократно, внутрибрюшинно, за 5 суток до
забоя).
6.8.3.3. Изучаемые дозы (концентрации)
Используется двухэтапная схема тестирования. Используются следующие конечные
концентрации : 0,1; 1,0; 10,0 и 100,0 мкг/мл. При обнаружении эффекта только при действии
одной концентрации вещества эксперимент повторяют в диапазоне концентраций в 2 и 5 раз
больших и меньших (2 этап).
6.8.3.4. Контроля
В каждом эксперименте обязательным является постановка негативного контроля,
которым является растворитель. В качестве растворителя используются дистиллированная
вода или диметилсульфоксид в конечной концентрации 1 % , а при необходимости - другие
растворители, которые используют в концентрациях, не вызывающих токсического эффекта.
В качестве позитивных контролей используют диметилнитрозамин, метилметансульфонат и
др. (Williams, 1985).
6.8.3.5. Проведение эксперимента
Последовательность операций, связанных с подготовкой и проведением эксперимента,
а также процедура оценки полученных данных и квалификация результатов испытаний
описана в соответствующих руководствах (Руководство по краткосрочным тестам для
выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ, 1989; Williams, 1985; Venitt et
al., 1986).
Уровень активности ферментов репарации, индуцированный действием исследуемого
вещества оценивают по включению [ : Н]-тимидина в ДНК используемых культур клеток в
присутствии ингибитора репликативного синтеза ДНК - оксимочевины.
Радиоактивность измеряют с помощью жидкостно-сцинтилляционного счетчика.
Показателем уровня индукции репара—изной активности служит «индекс метки».
6.8.4. Данные и их представление
6.8.4.1. Обработка результатов