Упрощенная HTML-версия
6.6.3.2. Метаболическая активация
В качестве экзогенной метаболической активации используется фракция S9 печени
крыс, предобработанных соволом (300 мг/кг, однократно, внутрибрюшинно, за 5 суток до
забоя).
6.6.3.3. Изучаемые дозы (концентрации)
Максимальная концентрация тестируемого соединения определяется его
токсичностью и растворимостью. Токсичность тестируемого соединения может изменяться
при использовании экзогенной метаболической активации. Для нетоксичных хорошо
растворимых соединений максимальная концентрация может быть в пределах 1000-5000
мкг/мл. Для тестируемых соединений с бактерицидной активностью максимальная
концентрация должна подавлять рост и бактерий дикого типа, и мутантных бактерий. В
любом случае должно проверяться не менее 5 различных концентраций тестируемого
соединения, различающихся например в 10 раз. При отсутствии эффекта рекомендуется
повторить тест с использованием более дробных концентраций.
6.6.3.4. Контроли
В каждом эксперименте обязательны одновременно проводимые негативный
(необработанный или растворитель) и позитивный контроли.
В качестве растворителя используется дистиллированная вода или, в случае
водонерастворимых соединений, диметил-сульфоксид (конечная концентрация в
инкубационной смеси не должна быть более 2,5 %).
6.6.3.5. Проведение эксперимента
Необходимые для проведения эксперимента оборудование, посуда, реактивы,
питательные смеси и растворы, проведение работ по получению фракции S9, а также
регламент работы с бактериальными культурами описаны в литературе (Bridges, 1972;
Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью
бактериальных тест-систем, 1981).
Опыт параллельно ведут с использованием микросомальной активирующей смеси и
без нее для регистрации действия как прямых мутагенов, так и непрямых, активность
которых связана с образованием мутагенных метаболитов, учитываемых при работе с
микросомальной фракцией.
В контрольных вариантах опыта вместо испытуемого образца вносят
соответствующий объем растворителя.
6.6.4. Данные и их представление
6.6.4.1. Обработка результатов
Наличие или отсутствие роста отмечается в таблице символами « + « или «-».