Упрощенная HTML-версия
6.5. Учет микроядер в клетках костного мозга млекопитающих
6.5.1. Термины и определения
Микроядра - небольшие ДНК-содержащие образования, состоящие из ацентрических
фрагментов хромосом или отставших на стадии ана-телофазы хромосом. На стадии телофазы
эти фрагменты могут включаться в ядра дочерних клеток или образовывать одиночные или
множественые микроядра в цитоплазме.
6.5.2. Цель исследования и принцип метода
Выявление и количественная оценка потенциальной цитогенетической активности
фармакологических средств в полихро-матофидьных эритроцитах костного мозга
млекопитающих.
Метод основан на микроскопической регистрации клеток с микроядрами. Спонтанная
частота клеток с микроядрами составляет 0,1-0,2% (Оценка мутагенной активности
химических веществ микроядерным методом, 1984)
6.5.3. Процедура тестирования
6.5.3.1. Лабораторные животные
Эксперименты проводят на самцах и самках мелких лабораторных грызунов.
Предпочтительно использование генетически однородных животных, не менее 6 особей в
каждой контрольной и экспериментальной группе.
Животные должны содержаться при 12-часовом световом режиме в условиях
свободного доступа к воде и пище.
6.5.3.2. Проведение эксперимента
В первой серии испытуемый препарат в дозе, соответствующей суточной
терапевтической для человека и в субтоксической дозе, вводят однократно только самцам с
фиксацией клеточного материала через 24 часа после введения.
Во второй серии испытуемый препарат в дозе, соответствующей суточной
терапевтической для человека, вводят самцам и самкам ежедневно на протяжении 4-5 суток.
Фиксацию клеточного материала осуществляют через 6 и/или 24 часа после последнего
введения в зависимости от фармакокинетических особенностей испытуемого препарата
(Оценка мутагенной активности химических веществ микроядерным методом, 1984;
Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных
химических веществ, 1989)].
6.5.3.3. Контроли
Негативным контролем является используемый растворитель.
В качестве позитивных контролей целесообразно использовать циклофосфамид в дозе
20 мг/кг при однократном внутри-брюшинном введении или любой другой известный агент,
заведомо обладающий цитогенетической активностью.