Упрощенная HTML-версия
6.4.3.2. Проведение эксперимента
В первой серии испытуемый препарат в дозе, соответствующей суточной
терапевтической для человека и в субтоксической дозе, вводят однократно только самцам с
фиксацией клеточного материала через 24 часа после введения.
Во второй серии испытуемый препарат в дозе, соответствующей суточной
терапевтической для человека, вводят самцам и самкам ежедневно на протяжении 4-5 суток.
Фиксацию клеточного материала осуществляют через 6 и/или 24 часа после последнего
введения в зависимости от фармакокинетических особенностей испытуемого препарата
(Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных
химических веществ, 1989).
6.4.3.3. Контроли
В качестве позитивных контролей целесообразно использовать циклофосфамид в дозе
20 мг/кг при однократном внутри-брюшинном введении или любой другой известный агент,
заведомо обладающий цитогенетической активностью. Негативным контролем является
используемый растворитель.
6.4.3.4. Приготовление цитогенетических препаратов
Методика выделения клеток костного мозга и приготовления препаратов для
цитогенетического анализа подробно описаны в соответствующих руководствах и ранее
опубликованных методических рекомендациях (Определение мутагенности химических
соединений (генетический скрининг) на лабораторных мышах (методические указания), 1977;
Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных
химических веществ, 1989). Полученные препараты (два стекла от каждого животного)
шифруют и подвергают микроскопическому цитогенетическому анализу.
6.4.3.5. Микроскопический анализ
Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Анализу подвергаются округлые
метафазные пластинки без наложений хромосом с модальным числом 40 - для мышей, 42 -
для крыс. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных
обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с
множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом.
6.4.4. Оценка результатов
Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей
клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытных сериях эксперимента.
Сравнение долей клеток с гепами и разрывами по центромере следует рассматривать в
качестве дополнительных критериев цитогенетической активности исследуемого препарата.
Статистическую
обработку
проводят
согласно
общепринятым
рекомендациям
(Статистическая обработка данных тестирования на мутагенность, 1989). Результаты
документируются согласно таблице.