Упрощенная HTML-версия
Под соматической рекомбинацией понимают обмен генетическим материалом между
гомологичными хромосомами соматических клеток в митозе, приводящий к образованию
мозаичных особей. При использовании в качестве маркеров рецессивных генов возможно
выявление генных мутаций, делеций, митотических рекомбинаций и генных конверсии.
6.3.2. Цель исследования и принцип метода
Целью данного метода является интегральное выявление рекомбинационных и других
мутационных событий, индуцируемых фармакологическим средством или его метаболитами
в соматических клетках личинок дрозофилы. В основе метода лежит учет мозаичных пятен,
возникающих у мух тестерных линий в результате комплексного нарушения генотипа:
митотической рекомбинации, потери хромосом и/или их фрагментов, транслокаций, делеций
и генных мутаций. В качестве маркеров возможно использование генов «у» и «sn 3 » в транс-
положении (Методические рекомендации по применению соматического мутагенеза у Dr.
melanogaster в качестве тест-системы для ускоренного определения канцерогенов, 1982).
6.3.3. Процедура тестирования
Биология, морфология, разведение дрозофилы, а также инструменты для работы с ней
и приготовление питательных сред подробно описаны в соответствующих руководствах
(Медведев, 1968).
6.3.3.1. Используемые линии дрозофилы
Для учета соматического мозаицизма в данной тест-системе необходимо поддержание
следующих тестерных линий дрозофилы:
линия 1 -
yellow - генотип у/у (у - рецессивный ген, обусловливающий развитие желтой
окраски тела и щетинок);
линия 2 -
w, sn 3 - генотип w sn 3 /Y (w - white - белая окраска глаз, sn 3 - singed 3 - извитая
скрученная форма щетинок; оба гена рецессивные);
Спонтанный уровень мутаций и рекомбинаций невысок и колеблется у разных линий в
пределах от 0,3 до 1,1 %.
6.3.3.2. Пути введения и выбор доз
Обычно используют один из двух способов введения испытуемых фармакологических
средств в организм дрозофилы: ингаляционный или пероральный (с кормом). Если препарат
нерастворим в воде, можно (при обязательной постановке соответствующихконтролей)
растворить его в этиловом спирте или диметилсульфоксиде так, чтобы конечная
концентрация этих растворителей в испытуемом растворе составляла 2 %. В любом случае в
культуру с кормом вносят 200 мкл тестируемого раствора. Возможно распыление
нерастворимых в воде соединений по поверхности питательной среды. Ингаляционные
затравки осуществляются в эксикаторах, в этом случае расчет доз производят на объем
эксикатора.
Токсичность фармакологических средств устанавливают по выживаемости самок F p
которая на максимальной из использованных концентраций не должна быть меньше 50%.
Всего в эксперименте определяют эффект 3 различных концентраций фармакологического
средства. В зависимости от токсичности фармакологического средства длительность