Упрощенная HTML-версия
Для опытов по учету рецессивных, сцепленных с полом летальных мутаций (РСПЛМ)
требуется линия дикого типа с хорошо изученным спонтанным фоном мутабильности,
например, Canton-S или D-32, а в качестве тестерной линии лучше всего использовать линию
BASC. В Х-хромосоме мух этой линии имеются 2 инверсии sc8 и d49, которые полностью
исключают возможность кроссинговерамежду половыми хромосомами, но не нарушают
жизнеспособности дрозофилы (Медведев, 1968). Феноти-пическими маркерами служат
мутации Apricot - абрикосовые глаза и Ваг - полосковидные глаза. В подобного рода
экспериментах можно использовать и другие тестерные линии.
6.2.3.2. Пути введения
и
выбор доз
Обычно используют два основные способа введения испытуемых фармакологических
средств в организм дрозофилы: ингаляционный и пероральный (с пищей). Чаще всего
используют последний, при введении соединения в корм. В этом случае целесообразно
использовать стеклянные пористые фильтры, погруженные в бкжсы с веществами,
растворенными в 1-5% сахарном сиропе в исследуемых концентрациях. Если препарат
нерастворим в воде, можно (при обязательном применении соответствующих контролей с
растворителями) растворить его в этиловом спирте или диметилсульфоксиде так, чтобы
конечная концентрация этих растворителей в сахарном корме не превышала 2 %.
Допускается внесение фармакологических средств непосредственно в корм. Ингаляционные
затравки осуществляются в эксикаторах. Расчет доз при ингаляционном введении производят
на объем эксикатора, а при пероральном - на объем корма.
В зависимости от токсичности фармакологического средства длительность экспозиций
может колебаться от нескольких часов до нескольких дней (обычно экспозиция составляет
48-72 часа). Комбинация различных концентраций и экспозиций позволяет ориентировочно
определять количество («дозу») фармакологического средства, вызывающую примерно 50%-
ную стерильность самцов. Эту «дозу» принимают за максимальную, которую используют в
эксперименте. Снижение «дозы» необходимо только в случае испытаний фармакологических
средств, обладающих выраженным стерилизующим эффектом.
6.2.3.3. Проведение эксперимента
После обработки изучаемым фармакологическим средством самцов линии D-32
скрещивают с девственными самками тестерной линии BASC (5 самцов х 10 самок). После
начала вылета мух первого поколения
(I`)
отбирают виргинных гетерозиготных самок и
индивидуально скрещивают их с самцами F r
После вылета второго поколения (F 2 ), каждая культура просматривается визуально с
целью обнаружения таких, в которых отсутствуют самцы дикого фенотипа (с красными
глазами). Общее количество культуральных пробирок определяет число проанализированных
Х-хромосом самцов, подвергшихся действию изучаемых соединений. Пробирки, в которых
отсутствуют самцы дикого типа, отмечают как «рецессивные летальные мутации».
Постановка контролей обязательна (Руководство по краткосрочным тестам для выявления
мутагенных и канцерогенных химических веществ, 1989).
6.2.4. Данные и их представление
Результаты опытов представляют в виде таблицы.