Упрощенная HTML-версия
36
4.
Липид-белковые комплексы. Структурные протеолипиды и
липопротеины. Липопротеины крови, их состав, роль в орга-
низме. Строение липидных компонентов.
5.
Фосфопротеины и металлопротеины, их биологические
функции.
Лабораторная работа № 1:
«О
ПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ
(
КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ
)»
Принцип метода.
Метод основан на образовании окрашен-
ного в фиолетовый цвет комплекса пептидных связей белка с
ионами двухвалентной меди (сульфат меди в щелочной среде).
Интенсивность окраски раствора прямо пропорциональна кон-
центрации белка в сыворотке и определяется фотометрически.
Фотометрические (абсорбционные) методы анализа основаны на
избирательном поглощении света анализируемым раствором.
При фотоколориметрии измеряется светопоглощение окра-
шенными растворами веществ в видимой области спектра. Для
этого используется прибор фотоэлектроколориметр (ФЭК), на
котором определяется оптическая плотность (экстинкция). Затем
по оптической плотности определяют содержание белка, пользу-
ясь калибровочной кривой.
Ход работы.
В четыре пробирки приливают по 0,2 мл рас-
твора белка. В первые три пробирки добавляют стандартные рас-
творы с содержанием белка 25, 50, 100 г/л. Эти пробы служат для
построения калибровочной кривой. В четвертую пробирку нали-
вают исследуемый раствор с неизвестной концентрацией белка,
которую нужно определить.
В каждую пробирку наливают по 4,5 мл биуретового реакти-
ва. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и оставляют
при комнатной температуре на 20 мин. для развития окраски.
Окрашенные растворы колориметрируют на фотоколоримет-
ре, пользуясь зеленым светофильтром (длина волны 540 нм) про-
тив воды.