Упрощенная HTML-версия
163
во-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид непосредственно реа-
гирует с диазореактивом. Неконъюгированный билирубин (свя-
занный с белками билирубин) реагирует с диазореактивом только
после диссоциации белкового комплекса, которая достигается
прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.
Ход работы.
В три пробирки вносят растворы согласно таб-
лице 19 и тщательно перемешивают.
Для определения общего билирубина пробы оставляют стоять
на 20 минут для развития окраски, а КБ на 5–10 минут после до-
бавления диазореактива.
Таблица 19
Определение билирубина в сыворотке крови
№
Растворы
Пробирки
1 2 3
Общий
билирубин
Конъюгированный
билирубин (КБ)
Контроль
1. Сыворотка (мл)
0,5
0,5
0,5
2. Кофеиновый р-
в (мл)
1,75
–
1,75
3. 0,9% р-р NaCl
(мл)
–
1,75
0,25
4. Диазореактив
(мл)
0,25
0,25
–
По истечении указанного времени фотометрируют каждую
пробу против воды на КФК при длине волны 520–560 нм (зеле-
ный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см. Из показате-
лей, полученных при колориметрировании общего и конъюгиро-
ванного билирубина, вычисляют показатель контроля.
Расчет.
Расчет проводят по калибровочному графику. Нахо-
дят содержание общего билирубина и КБ. Для определения уров-
ня НБ вычитают из показателя общего его содержания показатель
КБ.
Клиническое значение определения билирубина