Упрощенная HTML-версия
146
Иммуноферментный анализ (ИФА)
– современный метод,
обладающий очень высокой специфичностью, а потому позволя-
ющий определять незначительные концентрации самых различ-
ных веществ сыворотки крови, включая гормоны.
В основе иммуноферментного анализа лежит известная им-
мунная реакция антигена (АГ) и антитела (AT). Один из этих реа-
гентов является определяемым веществом, а другой узнающим,
обладающим известной стандартной специфичностью (избира-
тельностью) по отношению к определяемому веществу.
Для выявления образовавшихся иммунных комплексов (АГ-
АТ) используется фермент, которым предварительно метится
узнающий компонент (или АГ или AT). Сам фермент не виден,
поэтому визуализация присутствия вещества, определяемого ме-
тодом ИФА, достигается применением посредника – хромогена.
Это особое химическое соединение, которое хорошо растворимо
в воде и раствор которого бесцветен.
Превращение бесцветного хромогена в цветное вещество –
хромофор происходит под действием фермента, для которого
хромоген является субстратом.
Одним из вариантов может быть такой, когда хромоген окис-
ляется продуктом реакции, которую катализирует фермент, свя-
занный либо с антителом, либо с антигеном. Окисленное соеди-
нение приобретает окраску.
В качестве ферментов в ИФА используются пероксидаза, ще-
лочная фосфатаза, малатдегидрогеназа, ацетилхолинэстераза и
др.
Меченый ферментом специфический компонент в конце про-
ведения иммунной реакции находится в двух состояниях: связан-
ном (в составе комплекса антиген-антитело) и в свободном (не
вступившее в реакцию избыточное его количество).
Количество образовавшихся комплексов антиген-антитело, а
тем самым и содержание определяемого вещества оценивается по
содержанию ферментной метки в составе специфического иммун-
ного комплекса. Количество метки определяют по ее каталитиче-
ской активности.
Существует несколько вариантов проведения ИФА. Схема
наиболее широко применяемого метода двойного связывания,
или "сэндвич-метода", представлена на рисунке 3.