Упрощенная HTML-версия
ИФА, достигается применением посредника - хромогена. Это особое химическое соединение,
которое хорошо растворимо в воде и раствор которого бесцветен.
Превращение бесцветного хромогена в цветное вещество - хромофор происходит под
действием фермента, для которого хромоген является субстратом.
Одним из вариантов может быть такой, когда хромоген окисляется продуктом
реакции, которую катализирует фермент, связанный либо с антителом, либо с антигеном.
Окисленное соединение приобретает окраску.
В качестве ферментов в ИФА используются пероксидаза, щелочная фосфатаза,
малатдегидрогеназа, ацетилхолинэстераза и др.
Меченый ферментом специфический компонент в конце проведения иммунной
реакции находится в двух состояниях: связанном (в составе комплекса антиген-антитело) и в
свободном (не вступившее в реакцию избыточное его количество).
Количество образовавшихся комплексов антиген-антитело, а тем самым и содержание
определяемого вещества оценивается по содержанию ферментной метки в составе
специфического иммунного комплекса. Количество метки определяют по ее каталитической
активности.
Существует несколько вариантов проведения ИФА. Схема наиболее широко
применяемого метода двойного связывания, или «сэндвич-метода», представлена на рисунке
3.
1. Фиксация AT на поверхности твердой фазы
АТ
2. Отмывка или удаление избытка AT
3. Инкубация связанных с твердой фазой AT с анализируемым АГ, например, с
сыворткой крови, исследуемой на содержание определенного гормона (гормон выступает в
качестве АГ)
АГ
4. Отмывка
5. Добавление избытка меченых ферментом AT, специфичных к тому же
анализируемому АГ