Упрощенная HTML-версия
Берут 6 пробирок и вносят в три из них по 5 капель инсулина, а в три другие – по 5
капель окситоцина. Проделывают с ними биуретовую, нингидриновую реакции и реакцию
Фоля.
Биуретовая реакция
Принцип метода.
Метод основан на способности пептидных групп белков и
полипептидов образовывать в щелочной среде с ионами Сu2+ комплексное соединение
фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от числа пептидных связей
в белке.
Биуретовая реакция положительна с белками и пептидами, имеющими не менее двух
пептидных связей
(- С - NH -)
||
О
Ход определения.
В пробирки к 5 каплям раствора окситоцина и инсулина прибавляют
6 капель раствора едкого натра и 2 капли раствора сернокислой меди и перемешивают.
Содержимое пробирки приобретает фиолетовый цвет.
Нингидриновая реакция
Принцип метода.
Метод основан на взаимодействии нингидрина с альфа-
аминогруппой аминокислот, пептидов, белков с образованием окрашенного комплекса
синего или сине-фиолетового цвета.
При нагревании в присутствии нингидрина происходит окислительное
дезаминирование альфа-аминогрупп аминокислот и пептидов, а молекула нингидрина при
этом восстанавливается
Восстановленный нингидрин реагирует с аммиаком и другой молекулой окисленного
нингидрина, в результате образуется окрашенное соединение сине-фиолетового цвета.
Ход определения .
В пробирки к 5 каплям раствора окситоцина и инсулина приливают
5 капель водного раствора нингидрина, ставят пробирку на кипящую водяную баню до
появления сине-фиолетового окрашивания.
Реакция Фоля
Принцип метода.
Метод основан на способности белков, в состав которых входят
аминокислоты, содержащие слабо связанную серу (цистин, цистеин), в щелочной среде при
нагревании образовывать сульфид натрия (Na2S), который с плюмбитом натрия (Na2PbO2)
дает черный или бурый осадок сульфида свинца.
1) H2N – CH – COOH
H2N – CH – COOH + Na2S + H2O
|
+ 2 NaOH
→
|
CH2 – SH CH2 – OH сульфид
цистеин серин натрия
2) Na2S + Na2PbO2 + 2H2O
→
PbS + 4 NaOH
плюмбит осадок черного
натрия цвета
Метионин не дает реакции Фоля, т. к. сера в нем связана прочно.