Упрощенная HTML-версия
1. Характеристика путей обмена безазотистого остатка аминокислот. Гликогенные
и кетогенные аминокислоты.
2. Окислительное декарбоксилирование пировиноградной кислоты: строение
пируватдегидрогеназного комплекса (ферменты, коферменты).
3. Цикл лимонной кислоты: последовательность реакций и характеристика
ферментов.
4. Связь между общими путями катаболизма и цепью переноса электронов и
протонов.
5. Аллостерические механизмы регуляции цитратного цикла.
6. Образование углекислого газа в общих путях катаболизма.
7. Энергетическое и анаболическое значение общих путей катаболизма.
Лабораторная работа №1:
«СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА МЫШЦ
И КОКУРЕНТНОЕ ТОРМОЖЕНИЕ ЕЕ АКТИВНОСТИ»
Принцип метода.
Сукцинатдегидрогеназа мышц является железофлавопротеином и
катализирует окислительно-восстановительные реакции. В качестве окисляемого субстрата
берется янтарная кислота, в качестве акцептора водорода – краситель 2,6-
дихлорфенолиндофенол (синего цвета), который восстанавливаясь, превращается в
бесцветную лейкоформу. Источником фермента служит отмытая мышечная ткань
(гомогенат). Сукцинатдегидрогеназная активность тормозится в присутствии малоновой
кислоты, являющейся структурным аналогом сукцината.
Ход работы.
Для получения ферментного препарата 1-2 г свежей мышцы животного
(кролика), измельченной ножницами, растирают в ступке с небольшим количеством воды,
затем мышечную кашицу переносят на двойной слой марли, помещенной на воронку, и
промывают 25 мл дистиллированной воды. Промытую кашицу отжимают, переносят в
пробирку и суспендируют стеклянной палочкой с 4 мл воды. Полученную суспензию
равномерно разливают в четыре пробирки.
Содержимое первой пробирки кипятят в течение 1-2 мин для инактивации фермента.
Затем в пробирки приливают реактивы по схеме, приведенной в таблице 9.
Через 15 минут наблюдают окраску в пробирках, результаты и выводы заносят в
таблицу.
Таблица 9
Сукцинатдегидрогеназная активность мышц и конкурентное торможение ее
активности
№
пробирки
Сукци-
нат
(мл.)
Н
2
О,
(мл.)
Мало-
нат,
(мл.)
Краси-
тель
(кап.)
Окрас-
ка
Вывод
1
1
0,5
-
2
2
1
0,5
-
2
3
-
1,5
-
2
4
1
-
0,5
2