Упрощенная HTML-версия
1. В организме лабораторных животных.
2. В куриных эмбрионах.
3. В клеточных культурах – основной метод.
Типы клеточных культур.
1.
Первичные (трипсинизированные) культуры
– фибробласты эмбриона курицы
(ФЭК), человека (ФЭЧ), клетки почки различных животных и т.д. Первичные культуры
получают из клеток различных тканей чаще путем их размельчения и трипсинизации,
используют однократно, т.е. постоянно необходимо иметь соответствующие органы или
ткани.
2.
Линии диплоидных клеток
пригодны к повторному диспергированию и росту,
как правило, не более 20 пассажей (теряют исходные свойства).
3.
Перевиваемые линии
(гетероплоидные культуры), способны к многократному
диспергированию и перевиванию, т.е. к многократным пассажам, наиболее удобны в
вирусологической работе – например, линии опухолевых клеток Hela, Hep, Vero и др.
Специальные питательные среды для культур клеток.
Используются разнообразные синтетические (вирусологические) питательные среды
сложного состава, включающие большой набор различных факторов роста – среда 199, Игла,
раствор Хэнкса, гидролизат лактальбумина. В среды добавляют стабилизаторы рН (Hepes),
различные в видовом отношении сыворотки крови (наиболее эффективной считают
эмбриональную телячью сыворотку), L-цистеин и L-глютамин.
В зависимости от функционального использования среды могут быть
ростовые
(с
большим содержанием сыворотки крови) – их используют для выращивания клеточных
культур до внесения вирусных проб, и
поддерживающие
(с меньшим содержанием
сыворотки или ее отсутствием) – для содержания инфицированных вирусом клеточных
культур.
Выявляемые проявления вирусной инфекции клеточных культур.
1. Цитопатическое действие (ЦПД).
2. Выявление телец включений.
3. Выявление вирусов методом флюоресцирующих антител (МФА), электронной
микроскопией, авторадиографией.
4. Цветная проба. Обычный цвет используемых культуральных сред, содержащих
в качестве индикатора рН феноловый красный, при оптимальных для клеток условиях
культивирования (рН около 7,2) – красный. Размножение клеток меняет рН и соответственно
– цвет среды с красного на желтый за счет смещения рН в кислую сторону. При размножении
в клеточных культурах вирусов происходит лизис клеток, изменения рН и цвета среды не
происходит.
5. Выявление
гемагглютинина
вирусов
–
гемадсорбция,
вирусная
гемагглютинация.
6. Метод бляшек (бляшкообразования). В результате цитолитического действия
многих вирусов на клеточные культуры образуются зоны массовой гибели клеток. Выявляют
бляшки – вирусные «клеточно-негативные» колонии.
Номенклатура вирусов.
Название семейства вирусов заканчивается на «viridae», рода – «virus», для вида
обычно используют специальные названия, например – вирус краснухи, вирус
иммунодефицита человека – ВИЧ, вирус парагриппа человека типа 1 и т.д.
Вирусы бактерий (бактериофаги).
Естественной средой обитания фагов является бактериальная клетка, поэтому фаги
распространены повсеместно (например, в сточных водах). Фагам присущи биологические
особенности, свойственные и другим вирусам.