Упрощенная HTML-версия
Метод светлого и темного поля.
Наиболее распространенным приемом оптической микроскопии
является наблюдение фиксированных (т.е. постоянных препаратов, обработанных
стабилизирующими химическими веществами и помещенными под покровное стекло) и окрашенных
препаратов в проходящем свете, называемое
методом светлого поля.
Данный метод представляет
собой обычный способ наблюдения, т.е. когда все лучи, идущие от осветителя собираются
конденсором на предмете и, пройдя через предмет, попадают в объектив.
Наблюдение же нефиксированных (временные препараты без покровного
стекла и не обработанные химическими веществами, например, мазок) и
неокрашенных препаратов в проходящем свете не дает желаемых
результатов вследствие отсутствия достаточного контраста между
элементами структуры препарата, а также между препаратом и окружающей
средой. В этом случае используется метод наблюдения в
темном поле,
который осуществляется путем применения в обычном биологическом
микроскопе особого конденсора.
Конденсор К (рис. 7.5) состоит из нескольких линз особой формы,
образующих наклонные пучки света, которые освещают препарат П, но
затем проходят мимо объектива О. Падая на мелкие элементы структуры
предмета, свет рассеивается на них и таким образом частично попадает в
объектив. Это делает предмет видимым на общем темном поле зрения
микроскопа.
Метод фазового контрастна.
Метод применяется для наблюдения
прозрачных малоконтрастных объектов, в проходящем свете, и основан на использовании разности
фаз, образующейся при прохождении света через различные структуры исследуемого объекта.
Световые лучи идущие от источника, проходя через слой одинаковой толщины двух веществ
(например, объекта исследования и окружающей среды) с различными показателями преломления n
и n0, изменяют фазу колебаний. Разность фаз может образоваться и при прохождении через слой
одного вещества, но различной толщины. Увидеть детали таких объектов обычным образом
невозможно, т.к. глаз не восприимчив к различию фаз в световой волне. В биологических
исследованиях такие объекты иногда окрашивают, однако при этом могут изменяться их свойства и
жизнеспособность, что не желательно. Поэтому необходимо каким-либо способом преобразовать
изменение фазы световой волны, прошедшей через прозрачный объект в изменение интенсивности
этой волны, на которую глаз реагирует. Это преобразование производят с помощью, так называемой
фазовой пластинки, которая дополнительно изменяет разность фаз между световыми волнами на
такую величину, что в этом случае волны уже различаются по интенсивности.
Фазовая пластинка представляет собой слой прозрачного вещества определенной толщины с
определенным показателем преломления, имеющий форму кружка очень малого диаметра. Фазовая
пластинка помещается на пути лучей так, что через нее проходят или только лучи, прошедшие через
объект (структуру объекта), или только лучи, прошедшие через окружающую объект среду, которые
и получают при этом дополнительную разность фаз. Тогда в точке изображения объекта произойдет
затемнение, и объект будет виден контрастным на фоне окружающей среды.
Для фазово-контрастной
микроскопии применяют
особые объективы,
содержащие фазовую
пластинку, и специальные
конденсоры. Все эти детали
устанавливаются в обычный
биологический микроскоп.
Определение величины
предмета.
Определение
величины
микроскопируемого
предмета делается с
44
4
3
Рисунок 7.6 Внешний вид окулярно
винтового микрометра
Рисунок 7.7 Стеклянные
пластинки микрометра