207
14431067818011156112167
7.851596012870106
0,1991596012871106176
мкМ1203596012888155280
р-р1517596012870118188
ацетил-КоА.1740596012863136199260334404450544614716751
8.5851839012870106176
ед.1062839012863133168
малатдегидрогеназы12658390128891512212833444154775356106817518208789401014107711331227
Оборудование:спектрофотометр120510800128101171242313374445516576646716785848895209910800128621382002673293984685596296917608499119731042
с33641080012862
термостатируемой3649108001286112419428335241547653960067474481587596410341109
кюветой;49801080012868173239301363433508547
термостат8511321012861124194283352415476539600
с148613210128169
регулируемой169013210128176239297367435510580651711800871946
температурой;267113210128168231319393456525588648718786859935974
рН-метр;368113210128176278325414475537607645
рефрижераторная436213210128176239330399476572634704766828897967104211051168
центрифуга.8511563012875138213275343418509579635698733
Подготовка120518050128101171242297366468538599664734
исследуемого19731805012871133196257318389452513602673727796
материала.28051805012889159260322392462532593663699
Гомогенаты12052046012881152241310368430504567628721
тканейготовят19622046012891159221296358433490560622692759822883
на288020460128105168
холоде308320460128100169240310380443
на356120460128104166
бидистиллированной37632046012810117524732438744852259366273780787794410061080115512251300
воде50992046012895164236299
в54332046012896
стеклянном8512287012862124186254324389464538608697
гомогенизаторе15832287012858128216286344405480555611673734804874936
с25542287012863
тефлоновым26522287012861123213283353427498565658747
или34342287012875145219
стеклянным36882287012862124186254324388462538631721
пестиком.44422287012875138200262335404473562598
Реакцию12052529012878140203271346421526
проводят176625290128123193264331400471536597
в239725290128115
термостатируемойкювете254725290128110172242332402465526588650723793863924101310831159122613311397145915201583
при416525290128124193269
30оС.446925290128119189465924990824547042529012894129
Начинают486825290128150212282357433496600662
добавлением8512771012871142213276342412474548623686773
раствора16602771012888151214275341410479542
фермента223727710128110172242331393467529591
(гомогената).28632771012866123193283352410471546609670733779814
Контролем371227710128113186260322391461532594681
служит44282771012881152222317392454
проба49172771012893164235305368
без53202771012891153209
ацетил-КоА.8513012012862137200262335406452546616718753
Направленность189230120128101163237308370437507568642718787850911975
реакции31533012012870132194263338412488
на39303012012875138
карбоксилирования43553012012868130200271342410472547617691761831898960103411091173
пируватаобеспечивается851325401287515122029135541747954161168374680788294510141090115612191280134114031468
добавлением235532540128160230301363430500561636711773862
в325132540128155
инкубационную3441325401281632383073774475105856597298048799491053
среду453132540128151221284355425
ацетилКоА,малатдегидрогеназы,высоких49893254012815122628935042549585134950128941642663003894515215836447167788359109811051112111791240131613781434152715631629172317851855192319972068
отношений295534950128216278352423532593668742818
АТФ/АДФ+Фн,38093495012824733244348158367878986897910531089
ацетилКоА/КоА,4933349501282082833464084825528513737012894164266304398467569603
НАД-Н/НАД148937370128101202297345446485586686781
и23053737012875
наличием24163737012875137207282352427489578
ионов30293737012875145220290357
Mg2+.342037370128125195361537070824596118
В12053979012894
то133439790128214284
же165439790128250312
время200139790128220289352440505
эти254139790128214275350
отношения292639790128224285359429537599673749814
являются377539790128216283353417522583645710
ингибиторами4520397901282273013594345055816457147838469351009
пируватдегидрогеназы8514220012875151220291355417479550613670745816887957101510771151121312681363
(значит,22494220012895150225288358433494529
в281342200128114
данной296242200128119182257332403477
ситуации347542200128110185246317377452528603
будет411342200128120190260323383
ингибироваться453142200128122198256331402477547616683745807871932996
окисление8514461012870139213276346408483557620
пирувата)15064461012895170240311375437499561608
и21494461012895
малатдегидрогеназы2279446101281091712413053664385005586327047738439019631037110011551250
(также35644461012867128190257354417
ингибируется40164461012895170228303373448517588650712774839
окисление48904461012890159234297367429503578640
малата8514702012889151221283345407
до12934702012883154
оксалоацетата).14824702012882149212274344414476551613675737799861908943
Все24714702012894156218
это27254702012871133203
обеспечит29634702012882154217278352415485559621
такую36194702012873135203273377
направленность40314702012887150225295357423494556631707776839901965
реакции50304702012882145207274349424499
карбоксилирования8514945012868131201272342410473547617692761832899961103511101174
пирувата205949450128172247318388453515576639
без273349450128168231286
дополнительного305449450128168238313383453528602664726796860935100410621131
введения422149450128163229291362425499574639
в489549450128164
среду509449450128158229290362437
инкубации8515186012875151219289359422496571646
ацетил-КоА15325186012862137200261335406453547616718
и22845186012875
малатдегидрогеназы.2394518601288915222228334541547853560968175182087893910141077113312261262
Ход12055427012886155227
определения.14675427012810417424430637744050156363270276822355427012835
При230554270128134204280
объеме262054270128103174247309398460
кюветы311554270128102207273335396489
3364054270128103
мл377854270128122192
в40055427012899
нее414054270128107170232
вносят44085427012899174244307371432
по487554270128109179
0,3509054270128103139207
мл533354270128122192
растворов8515669012870133195257323392462532599
натрия148556690128104167227297372436
пировинограднокислого,195756690128104179249319386461535604662733794866940101110781154121512851356141314831519
АТФ,351156690128131216326361
MgCl23907566901281542243183564267572408245
,43125669012835
КНСО34382566901281222233164184800572408245
и488056690128105
НАД-Н.502056690128131232327375476511
Ингибирование85159110128101176234309380455525594661724799873935
активности182159110128143211271347413488557620682757
пируваткарбоксилазы261359110128154229299370434496558626688759829900969103011051175123712931386
в403459110128146
контрольной421659110128148218292354424494564628703772848
пробе509959110128155225294366428
может8516152012889159257319380
достигаться12666152012878148210271346404467528592654717
не20186152012883145
только21986152012868139209273340410
за26436152012862125
счет28036152012869139202263
исключения31016152012882145212282387457519594669734
введения38706152012873139201272335409485549
в44546152012873
нее45626152012882144207
ацетил-КоА48046152012869144207268342412463556626727
или8516393012875145220
20-минутной11076393012879148196285359434505564640710785
преинкубации19276393012885154217292366435505575638713787862
пробы28246393012884155224295390
с32516393012871
авидином,33576393012872138213285361435505594629
но40216393012884154
и42116393012884
за43316393012864125
счет44916393012872142205266
исключения47926393012885147215285390462525599674738
из8516635012875131
среды101766350128117186249320414
инкубации146666350128129204272342412475550624699
активаторов220166350128116184245320387448509580649719785
фермента302166350128146208277367429503565627
–368366350128127
АТФ,384666350128156241352386
MgCl24267663501281802483433824649669008245
и472966350128129
субстрата489366350128117188257321382452514575637
карбоксилирования8516877012868131201272342410473547617692761832899961103511101174
KHCO32059687701281302313244252484693208245
.25306877012835
Определение260068770128130204275338409472542604678753816
оптической34516877012897173234308379441503571640716
плотности420268770128104174242304379452515576650
ведут48876877012895157229299359
при528168770128103174248
длине8517118012871142217291354
волны124071180128164234304379473
340174871180128168238308
нм.209071180128173263298
В242371180128191
кювету264971180128166271337399460531
вносят321471180128164239310373437499
необходимые374871180128172234305375445516586661750844906
компоненты468971180128166236329403473548611685746839
инкубационной8517360012875151219289359422496571641716791860936
среды.18227360012868137200270365402
Реакцию22597360012884146208276351425530
начинают28247360012881143214288364425529590
внесением34497360012872147209271334409484546635
фермента.41257360012891153222312373448510574609
Через47747360012892154223286341
1051507360012876145
сек53317360012868130198
после8517601012875146208278341
внесения122776010128116189252314377451525590
фермента185276010128141204273362424498560622
проводят250976010128125195264331401472537598
первоеизмерение31427601012812418625632339645753358867773880887194510201082
показания426076010128125194262324380442517592657
прибора,495276010128124195269341411480543578