203
13431067818011156112167
тиаминпирофосфат851596012861136199288362437512587657726818887950104111031164
–2049596012892
0,22176596012891126196
мл.24075960128110180214
Данную26565960128117179254329399502
среду3193596012884154217287358
готовят3584596012879149211281348412474
непосредственно40935960128951572313023634334955666286907568188939681037
перед5166596012896158228290361
использованием.8518390128751382132823534164715426086707448208819701005
Оборудование:центрифуга,12051080012810117124231337444551657664671678584889520991080012875138212273342418508578634697732
спектрофотометр.2866108001286213719926832939946956062969176084991297310421077
Получение120513210128101171233295362425494563626
экстракта20501321012862127189291361430496598668
митохондрий.2935132101289016026233039346253260367374381337511321012835
Его40041321012886143213
получаютметодом4434132101287514621628635541752258367273479586693610071095
дифференцированного8511563012871147237328391460523597672747817887953101610891165123412941364
центрифугирования2251156301281011632393003694445356056617368078769431004107911551219
в35051563012893
среде36331563012890160223293356
выделения,40241563012894188258321391452527603667702
содержащей47611563012889159230293362460522630691766
0,2258511805012870106176245316
М120718050128125
маннитол,13711805012889151226301376438507577612
0,07520181805012874110180249320
М237818050128125
сахарозу25381805012866129198260331400456526
и31021805012875
0,1мМ32121805012876112182271394
ЭДТА.Навеску36461805012893188274375409511572639701763832902
ткани45821805012866134197272347
около49651805012874143212282352
153531805012874
г54631805012862
гомогенизируют8512046012858128217286344406480556612685756826929990
в18762046012895
4-кратном20062046012898147215285347409483553642
объеме26842046012897168241303391454
буферного31732046012899169258321391467536594663
раствора.38722046012898161222284350420489552586
Для449320460128124194259
разрушения47872046012898161217285356462525600675740
выделенных8512287012866161232295365427501576670739
митохондрий162622870128201276338407477547622692763838913
к257422870128181
осадку279022870128183245307378446515
добавляют334022870128183254326389455525589694755
1413022870128182
мл434822870128200270
0,33%465222870128183219289359477
р-ра516322870128183234303366
дезоксихолата,8512529012871134190260327390464534604674736798860895
содержащего178125290128154223294356426524586693755813882
1269925290128162
мг289525290128181239
сывороточного316925290128153247314384453523585655725800870928997
альбумина.420125290128155225287358429518594669732767
Осадок500325290128193255317389458527
митохондрий8512771012889164225296366435510581651726801
суспендируют168727710128122192253328391466538613684754858918
в264127710128125
среде280127710128122192255326389
выделения322527710128126221292355425487561636700
и396027710128135
затем413127710128115177238301390
подвергают455627710128134204276343404474532594698760
3кратному5350277101281308513012012868138201263337407495566
замораживанию-оттаиванию.1450301201281081702593293994625596347007628389121017106411351196125813191394146015231596167217771810
После329630120128153223285355418
окончания374930120128122191260335405468542617681
этой446430120128113174244320
процедуры481930120128126197267341404475546614708
пробы8513254012875146215286381
центрифугируют126632540128751372132743434185095796357107818519551016
2523163254012871141
минут24933254012889164238308368
при28963254012875145221
1800031503254012871140211281350
g.35363254012870105
Ход12053495012886155227
работы:14663495012871140211281382477524
В12053737012894
пробирки13343737012875145215286361431499574
вносят19433737012866141211274338400
инкубационную23763737012875151219290359422496571641716791861964
смесьследующего3375373701286215121427634040247253460667677988794910071077
состава:44883737012862132194256317382444483
0,112053979012870106176
М141639790128125
калий–фосфатный1576397901286812919927434941951058064373379585793110251100
буфер,27113979012872142231294364400
рН31453979012870172
7,8–33503979012870106176247
136313979012870
мл,37363979012889159194
0,112054220012870106176
М141642200128125
р-р15744220012871118187
янтарной17974220012864139201264333407478552
кислоты,23834220012869144207277345407501537
рН29554220012870171
7,8–31594220012871106176247
0,134414220012870106175
мл,36514220012889159194
2512054461012870141
мМ13814461012889212
р-р16294461012870117186
ЭДТА,18514461012892188273375409
рН22954461012870171
7,8–25004461012870105176247
0,127814461012870106176
мл,29924461012889159194
15012054702012870141210
мМ14514702012889214
р-р16984702012870118187
азида19204702012863118193263326
Na–228147020128102163234
0,125514702012870105174
мл,27604702012889159194
Н21205494501281011306500008245
О–135149450128101171
0,115584945012870105174
мл.17674945012889159194
Общий120551860128101172281356430
объѐм16715186012870140213275364
пробы–20705186012875144214286380451
1,425555186012870106176
мл.27675186012888159193
В12055427012894
пробы133454270128109180249321415
вносят178454270128101176246308373434
по225454270128109178
0,5246754270128104140210
млсуспензии271254270128125195257327388463526601657732806
митохондрий355454270128123198259329400469544615685760835
(либо44245427012881151226298367
гомогената48265427012892162252322380442516579640702
ткани).8515669012861130192267341388424
Образцы131056690128124195266329384458552
инкубируют18985669012899173240311380456526597700761
при26945669012899169245
комнатной29745669012892162252325388449525594668
температуре36785669012885147236311373443506567637705768
в44805669012890
течение46055669012885147218280355431494
551345669012893
мин526356690128112188262
для8515911012871142206
ингибирования10925911012875150207283353428498568635697771846910
цитохромоксидазы2037591101287515021228135242149158064971878085492698810431137
азидом32105911012861116191263333422
натрия.36655911012876138200270344409444
Реакцию12056152012878140203271346421526
начинают176661520128182244315390464527632692
прибавлением249361520128182253327399461527597659734808871960
к348861520128174
пробам369761520128183253323394457546
0,1427861520128176212282
мл459561520128196264
раствора489461520128178241303364431501570633
феррицианида8516393012891153224294369444518581656730801864
калия,17506393012878140210285348383
пробы21696393012885154225296391
инкубируют25946393012886160228299368444514584688749
в33786393012877
течение34906393012872134206269344419481
1540066393012880149
мин.41916393012899173247283
при45096393012885155230
температуре47746393012871134223298359429491553623691754
300С.851663501287014199166050824510376635012894129
После120568770128101171234304366
инкубации16066877012881155223294363426501576651
реакцию22936877012874137198266341416521
останавливают28496877012876139200261336399465535608675737841902
добавлением37866877012877147218281347417479554628691780
к46016877012873
пробам2,047096877012881150221292354443512552622
мл53716877012889159
208517118012870141
%102771180128225
ТХУ.128671180128194295393428
В175071180128201
контрольные198671180128175246321383452521592656730825886
пробы,290871180128182252322393487522
содержащие346671180128169239310373442540601709784847
все434771180128173236298
компоненты468071180128176246336409480554617691753846
инкубационной8517360012875151219289359422496571641716791860936
смеси,182273600128179267330392467502
ТХУ236073600128203304403
добавляется279873600128189259330392457527591653715777842
передвнесением3675736001281922553253874595255996627247858609369971086
суспензии479673600128181251312387450525581655730
митохондрий8517601012889164225296366435510581651726801
либо19707601012870145216286
гомогената.25747601012858128216286344405481543605666700
В35927601012894
контрольных40037601012868138214276345418487551626720791
пробах51117601012875146215286349418