187
12631067818011156112168
0,225851596012870106176245316
М12075960128125
маннитол,1371596012889151226301376438507577612
0,0752018596012874110180249320
М23785960128125
сахарозу2538596012866129198260331400456526
и3102596012875
0,1мМ3212596012876112182271394
ЭДТА.Навеску3646596012893188274375409511572639701763832902
ткани4582596012866134197272347
около4965596012874143212282352
15353596012874
г5463596012862
гомогенизируют851839012858128217286344406480556612685756826929990
в1876839012895
4-кратном2006839012898147215285347409483553642
объеме2684839012897168241303391454
буферного3173839012899169258321391467536594663
раствора.3872839012898161222284350420489552586
Для44938390128124194259
разрушения4787839012898161217285356462525600675740
выделенных8511080012866161232295365427501576670739
митохондрий162610800128201276338407477547622692763838913
к257410800128181
осадку279010800128183245307378446515
добавляют334010800128183254326389455525589694755
1413010800128182
мл434810800128200270
0,33%465210800128183219289359477
р-ра516310800128183234303366
дезоксихолата,8511321012871134190260327390464534604674736798860895
содержащего178113210128154223294356426524586693755813882
1269813210128163
мг289513210128181238
сывороточного316913210128153247314384453523585655725802871929999
альбумина.420313210128154224287358429516592667730765
Осадок500313210128193255317389458527
митохондрий8511563012889164225296366435510581651726801
суспендируютвсреде168715630128154225285360423498570646715786889950101610781148121112831345
выделения306715630128159252323386456519592667731
и383415630128167
затем403615630128148210271334421
подвергают449215630128167238308375437506564627731793
3кратному5319156301281638511805012868138201263337407495566
замораживанию-оттаиванию.1450180501281081702593293994625596347007628389121017106411351196125813191394146015231596167217771810
После329618050128153223285355418
окончания374918050128122191260335405468542617681
этой446418050128113174244320
процедуры481918050128126197267341404475546614708
пробы8512046012875146215286381
центрифугируют126620460128751372132743434185095796357107818519551016
2523162046012871141
минут24932046012889164238308368
при28962046012875145221
1800031502046012871140211281350
g.35362046012870105
Непосредственно1205228701281011632383093724415035746376987658279019761046
перед228622870128139201271334405
работой272622870128135197268338400469543
готовятинкубационную3305228701281221922543233884535145896647328028729351010108611551230130513761479
среду482222870128127197260331402
для525722870128136207271
проведения8512529012875146215282344414477552627691
ферментативной15782529012818524831740646854260466672880386994310131088
реакции,270125290128165227290358432507581617
содержащая335325290128157227298361430528590698759824
в421225290128162
объеме440825290128166237310372461522
2,9496525290128166202270
мл527125290128184254
следующие8512771012862132195266336440547623685
компоненты15712771012878148237311381456518593655749
(в23552771012856123
мкмолях):25222771012888155244313384448518566604
калий31632771012877139209284359
фосфатный35672771012891160223313375436511605680
буфер,42822771012881151240303373409
рН47262771012878179
7,449402771012879115185
–51602771012881
300,52762771012879149219255
α-кетоглутарат8513012012874120188251312382440510580640702772835896
–178230120128134
6,195230120128133169
НАД215630120128165266361
–1,255330120128134204240
коэнзим282830120128131201262336392465555
А341830120128165
–361830120128134
0,45,378830120128134169239309344
дитиотриэтол416730120128136210272346416478547622683744813883
–508530120128135
1,5,525630120128134169239274
тиаминпирофосфат8513254012861136199288362437512587657726818887950104111031164
–20503254012870
0,221563254012870105174
мл.23663254012888158193
Ход12053495012886155227
работы14663495012871140211281382477
Навески120537370128101163229292354422497
НАД173837370128196296392
и216537370128168
изоцитрата236837370128170226296370446507576639700763
растворяют316637370128163226288349414485555619724785
перед398637370128169232301364434
приготовлением4456373701281692393133714415035726397097708469209831071
инкубационной8513979012875151219289359422496571641716791860936
среды.18223979012888157220290385421
В227839790128119
пробу243239790128100170240312383
вносят28483979012892167237301364424
компоненты33073979012895165254328398473536610671766
инкубационной410839790128100175244314384446522596665741815886960
среды,51043979012888157220290385420
которые8514220012868138200269340434496
заранее13824220012857119189251326388450
смешивают18674220012863152214322397464526631692
в25944220012867
указанных26964220012872138200256318393469563633
пропорциях33654220012875145215290360429505579644713
в41144220012867
объеме,42164220012870142214276365427462
зависящем47134220012856119185260322387495557646
от53944220012872132
количества8514461012868138209284354416478540606668
проб.15534461012875145215286322
1.12055321012870106
трис-НСl-буферный13465321012861131205268315416509548595666737826888959103411271203
р-р25825321012871118189
2.12055563012870106
Р-р13455563012878125195
MnСl21576556301281251942883261902561808245
∙19475563012835
420175563012870
H22122556301281022223561808245
O226955630128101
3.Р-р12055805012870106184230301
НАДФ154158050128101202297408
4.12056047012870106
Р-р13456047012878125195
DL-изоцитрата157660470128101186233308363432508582644713775837898
5.12056288012870106
H21345628801281021446634308245
O149262880128101
-32534718012847
1,528994959012870106176
мл;31104959012889159196
-32535200012847
0,528995443012870106176
мл;31105443012889159196
-32535684012847
0,528995925012870106176
мл;31105925012889159196
-32536167012847
0,128996409012870106176
мл;31106409012889159196
-32536650012847
0,328996891012870106176
мл.31106891012889159193
В12057148012894
термостатируемую133471480128118181251340409472533595657731801872932102110911196
при256471480128132203278
25о2878714801281261963076711808245
Скювету31947148012894162267333395456525
вносят375471480128123198268331396457
по424671480128133202
2,9448471480128126162232
мл475171480128145215
готовой500171480128114185246317383452528
инкубационной8517390012875151219289359422496571641716791860936
среды.18227390012871141203274368404
Затем,22617390012878141202264353388
не26847390012883146
вынимая28657390012875170244319407470534
кювету34347390012878183249311372442
из39107390012884140
прибора,40857390012884154229300369440501537
добавляют46577390012880150222283349419483588650
0,153427390012879114183
мл8517631012889159
суспензии104476310128136207267342405480536611685
митохондрий176576310128161237298367438507582654723799873
и267476310128150
перемешивают285976310128148211280343432493601676742805910970
смесь.Реакцию386476310128135224286349413449527589651718794869974
начинают487376310128148209280355430492597657