179
12531067818011156112167
(НАД-ИцДГ)1475601012647156257353400509590686775821
в2331601012676
биологическом2442601012670151221300370435515594656718799869963
материале3440601012696166235297375454524603666
ферментативным414260101269715823633239447554361368276383991810271123
методом3104844012696158227297368437533
Принцип.НАД-ИцДГ-за120510800128101171247321396471546582178710800128101202297345213210800128101176271351398454516
катализирует29481080012868131192254324398454529598669729790
обратимую40381080012870142212274336410499569672
реакцию50091080012870133195264338413518
окислительного8511321012870139213276346421482544615678753822880949
декарбоксилирования1836132101287914221027234241348355261368975983290397310391102117512511315
изолимонной31861321012884139209279354443513588663732808
кислоты,40291321012876151214284353415508543
в46071321012875
ходе47171321012878149220283
которой50341321012877147209278347417492
образуется8511563012870142212274330400460522584649
α-кетоглутарат,15351563012874120188251312381439509579638701771834895930
СО2249915630128941952695161808245
и27631563012875
восстановленная287315630128671361992613223844585285956657278018769391002
форма39101563012891160231319382
НАД–432715630128101202297369
НАД-Н:473215630128101202297344445484
Изоцитрат120518050128101156226302377439508571632
+18721805012879
НАДИцДГ-заα-Кетоглутарат198618050128101202297399473569649696752814888934102810901151122012781348141814781540161016731734
+37551805012880
СО2386918050128941954064186008245
+41101805012879
НАД-Н422418050128102202297345446
+47051805012879
Н+.481818050128102491917750825173
Принцип120520460128101171242312381450521
метода.176120460128241303405473545615652
В25992046012894
процессе272820460128226296366441503565627690
окислительного34522046012822028936342549557063269476482890397210301099
превращения458820460128226295358424494556664726800876940
изолимонной8512287012875131201271346434504579654724798
кислоты16852287012869143205275346406500
до22202287012872143
α-кетоглутаровой239922870128731211882513123814395095796397017718429079781053
происходит34882287012875144215289352421491562637698
восстановление42212287012867138199260322384459529595665727802876939
НАД.519622870128101202297332
Количество8512529012894164234309380441504565631700
восстановленного1775252901286613619926032138345852859566572780187694610041073
НАД-Н,307125290128101201296344446480
котороерегистрируется377525290128681382002693404094725416046607367988609291004107411441205126613281393
на53912529012875138
спектрофотометре851277101286213820026833039946856062969176184991297310431105
при199027710128167237312
длине233727710128164234309383446
волны340281827710128158228298372467538609679
нм,353227710128167255291
эквимолярно385827710128151220286361450519590654724799868
количеству476227710128160230301374445507570631697767
окисленного8513012012870139213276346408483557627685755
изоцитрата.16403012012875131201276351413481544606668703
Реактивы:1205325301288614821828438545651661118163256012647
1.0,112053495012870106176211280
М152034950128125
трис-НСl-буферный16803495012861131206268316417511548596667738827889959103511291203
р-р,29193495012870116186222
рН31743495012870172
7,4.33813495012870105175211
2.0,0212053737012870106176211280351
М159137370128125
р-р17493737012870118188
MnCl21972373701281251952883272299379308245
∙23433737012835
424143737012870
H22520373701281012620379308245
O.266637370128101136
3.0,00312053979012870106176211280351420
М166139790128125
р-р18193979012870118188
НАД.204339790128101202297332
4.0,0812054220012870106176211280351
М159142200128125
р-р17494220012870118188
DL-изоцитрата197242200128102187233308364434508584645714777838901
натрия.29074220012875138199268343408443
Ход12054461012886155227
работы.1466446101287114021128138247719434461012835
Приготовление120547020128101171242296366468536598659721791860923
экстракта21634702012861127189289359430496597666
ткани.28644702012810216723630637632434702012835
Дляэтого12054945012896166230291352422480549
необходимо17894945012888151220291362431503578666736
выделить25604945012879174244307377452514578
митохондрии.317249450128102177238308378448523594664739814849
Накануне407149450128101163231294369440513576
готовят46834945012870140202272339402463
среду51814945012876146209279350
для8515186012871142206
выделения109251860128122216286349419481557631696
с182351860128118
рН197651860128124226
7,4223651860128125161231
следующего250351860128117187249319390493601663721791
состава:332951860128117188249311373439502541
0,225390551860128124159230299369
М430951860128178
р-р452351860128125174243
маннитола,480151860128144206281356431493561632694729
0,075Мр-р8515427012870106176245316440510557627
сахарозы,151354270128130192261324393463519612648
0,1мМр-р219654270128136172242331456525574643
ЭДТА,287554270128159255341442476
а338654270128129
также355054270128128191259356419
среду400454270128129199262334404
для444254270128139209273
разрушения475154270128137199255325395502564640715779
митохондрий8515669012889164225296366435510581651726801
–168756690128165
0,33%188856690128166201271341459
р-р238156690128165213282
дезоксихолата.269856690128167229284355422484559629700770832894955991
инкубационная3724566901281702453133834535165916657368108869481012
среда477156690128158227290360423
для522956690128166237299
проведения8515911012875146215282344414477552627691
ферментативной15785911012818524831740646854260466672880386994310131088
реакции,270159110128165227290358432507581617
содержащая335359110128157227298361430528590698759824
в421259110128162
объеме440859110128166237310372461522
2,9496559110128166202270
мл527159110128184254
следующие8516152012862132195266336440547623685
компоненты15716152012882153242316386461523598659754
(в23606152012861127
мкмолях):калий252261520128103171259329400464533580618688750820895970
фосфатный352861520128104174236326389450525619694
буфер,42586152012884155244306376412
рН47056152012883185
7,449246152012884120190
–51496152012886
300,52706152012885154225261
α-кетоглутарат8516393012874120188251312382440510580640702772835896
–178263930128134
6,195263930128133169
НАД215663930128165266361
–1,255363930128134204240
коэнзим282863930128131201262336392465555
А341863930128165
–361863930128134
0,45,378863930128134169239309344
дитиотриэтол416763930128136211272346417478547623683745813884
–508563930128135
1,5,525663930128134169239274
тиаминпирофосфат8516635012861136199288362437512587657726818887950104111031164
–20496635012892
0,221766635012891126196
мл.240766350128110180214
Данную265666350128117179254329399502
среду31936635012884154217287358
готовят35846635012879149211281348412474
непосредственно409366350128951572313023634334955666286907568188939681037
перед51666635012896158228290361
использованием.85168770128751382132823534164715426086707448208819701005
Оборудование:центрифуга,12057118012810117124231337444551657664671678584889520997118012875138212273342418508578634697732
спектрофотометр.2866711801286213719926832939946956062969176084991297310421077
Выделение12057359012886180251313374437506576639
экстракта20597359012862127189291361430496598668
митохондрий.2942735901289015926133039246253360467274281237577360012835
Его40067360012886143213
получаютметодом4434736001287514521528535441752258467273479686693610071095
дифференцированного8517601012871147237328391460523597672747817887953101610891165123412921362
центрифугирования2249760101281011642393013694445356066627378078779441005108011551219
в35037601012894
среде36327601012889159222293355
выделения,40227601012894188259322392452531607671706
содержащей47637601012889159230293362460522630691766