210
11731067818011156112167
3.1205596012870106
0,1%1346596012872107176293
раствор1674596012872135197258325393463
КоА2174596012894164265
(готовят2474596012848106176238308375438499
на3010596012875138
буфере3183596012872143232295365427
трис-HCl,3645596012863133209270320422515554590
704270596012870141
мМ,4448596012889213248
рН4731596012872174
8,0,4939596012872108178213
перед5188596012875138207270340
проведением851839012875146215282344414477553627690779
исследования).1663839012875138200270333403472539601676750815862897
Ход12051080012886155227
определения.146710800128121191260323394457518580650719784819
Выделяют23721080012894188259322392456561622
митохондрии302910800128139214275345415485560631702776851
из391610800128125181
исследуемой413210800128125187248318381452522583672742818
ткани498510800128112180242316392
в541210800128116
0,01М8511321012870106176245371
фосфатном125713210128119188251341403464540609699
буфере19911321012898169258320391454
дифференцированным2480132101289917426535541748855062569977484491498010431117119212861375
центрифугированием.389013210128103166240301370446536606662737808879945100810811157121813071342
Для526713210128124194259
анализа8511563012862137200270345401463
берут13491563012874136207277337
навеску17211563012878141207269332399469
ткани22241563012865133196271346
около26061563012873141211282350
129921563012873
г31001563012861
и31961563012879
гомогенизируют33091563012861131221291349411485559615690760830933994
в43381563012869
4-кратном44431563012875126195264327388462532622
объеме51001563012872144217278367430
буфера.8511805012871142231294364427462
Осадок134818050128184245308379449517
митохондрий190018050128172246307378447517592663734808883
подвергают281818050128158228299366428497557619724786
3-кратному363818050128153200267337400462536605694765
замораживаниюоттаиванию44371805012813820028935942949358966473079386794110468512046012870132193256331397458533608713
для15982046012883154218
того,18512046012873144201270306
чтобы21922046012882143214285379
разрушить26062046012882145200269340446521583647
субклеточные32882046012873145214283353415477547618692786848
частицы41712046012882145207268343418512
и47182046012887
обеспечить48402046012882154215278353415485560622686
максимальную8512287012889151219282357445508578641716786889
доступность177522870128110180243305373447522593655717781
субстрата259022870128101171241303365435498559621
и324622870128112
кофакторов339422870128106176267329397459528601670737
для416622870128109180244
фермента.444522870128128190261350411486548610646
После512622870128139208270340402
окончания8512529012870139208284354416491566631
этой15172529012860121190265
процедуры18162529012875146215290353424495563658
пробы25082529012875145215286380
центрифугируют292225290128751382132753444195105806367117828529551016
при39732529012875145221
1800–200042292529012871140210280354424494564634
g.48982529012870105
Для12052771012896166230
проведения14702771012893164233300362432495569645708
ферментативной2213277101281091722413303924665285906537287958699381014
реакции32622771012888150212280354430504
в38022771012883
кювету39212771012885190256318379450
спектрофотометра4404277101288015521828634741748857964971178086993199310611124
шириной85130120128108183253329403473548
1143430120128105
см15743012012896185
наливают179430120128109171241316382445549610
1,8243930120128105140209
мл268430120128123193
инкубационной291130120128110184253323393456531605675750825895970
среды,39163012012897166229299394429
добавляют438030120128104175246309375445509614675
0,1509030120128103139209
мл533430120128124192
митохондриальной851325401288916422529636643551058165172678985992399710671141
взвеси,202732540128171227292355417492527
помещают258932540128181250339400509571675736
в336032540128171
прибор.356632540128180251325396466536572
Реакцию417332540128183244306374449524629
начинают483732540128180242312387462525630691
внесением8513495012866141204266328403478541628
в151534950128104
кювету165434950128106211277339400469
0,1215634950128108144214
мл240534950128127197
раствора263734950128108171233294361431500563
коэнзима323534950128105175236311367441530592
А.386234950128139174
Изменение407134950128139194283345420482557632694
оптической480034950128108183244320389452514582652726
плотности8513737012875145215277351421484545619
пробы,150637370128109179249320415450
вызванное199037370128100195252319380455530600662
образованием268737370128105177246309364433500562636711774862
восстановленной3584373701281021722332963574194935646317017628369119811056
формы467537370128125196266355448
НАД,515837370128137238333368
регистрируют8513979012870133191265327388459533603673776837
при17233979012889160235
длине19943979012884153228303366
волны23953979012880149220294388
34028183979012884154224
нм30773979012889178
через32903979012884146216279335
каждые36603979012881143240311405467
1541623979012884154
секунд43513979012877139206276350422
в48083979012880
течение49233979012875138208271346420483
254413979012883
минут.8514220012889164239310370405
Расчет.12054461012886155218285347449484
Активность172744610128101169230306372446516579641705
пируватдегидрогеназы24684461012875151220291355418479550613670745816887957101510771151121312681362
(в38664461012850116
молях40204461012889159230294363
НАДН/минна442244610128101202297398436525600675750812
152694461012873
мг53814461012889146
белка)8514702012871134204273335382
вычисляют12684702012866158229304366436501606666
по19694702012875145
формуле:21494702012891160231320390458520559
Х120549450128101
=13414945012879
Е14554945012885
Δ15754945012890
V170049450128101
Δ18354945012891
6,2219614945012870105176246
a,2244494501286297
где:23764945012857127190229
ΔЕ12055186012890176
–14155186012870
изменение15215186012875130219282357418493568630
оптической21875186012870144206279350413475542613687
плотности29105186012875145214275351420483544618
пробы35625186012875145215286381
за39785186012855117
141295186012870
мин;42355186012888164238277
V120554270128101
–134154270128190
конечный156654270128188258333396465540634710
объѐм231154270128189260333395484
пробы283054270128194263334405498
в336454270128186
кювете358354270128188293359421482545
(2,0416354270128166236272341
мл);453954270128209277324363
6,22493754270128190226294365
–533754270128193
коэффициентмикромолярной851566901286813819929038045553060566774280489296610351104117312621332140214671536161116811756
экстинкции28725669012860127189251326400469544618693
восстановленной382956690128661361992603223844595295956647268018779461022
формы51135669012891161231320414
пиридиновых8515911012875151220296366441516586652747816
нуклеотидов17025911012875146212282345415476551622692759
при24955911012875146220
длине27495911012872142217292354
волны31385911012866136205280375
34035485911012870140209
нм;37935911012875164202
а12056152012862
–13026152012870
количество14086152012868138209284354417478539606676
белка21196152012872134204271332
в24866152012867
пробе,25876152012875145216288350385
определенное30076152012870145215278348411481543617692761824
параллельно38666152012875138207270340410472542606680749
с46516152012862
проведением47516152012875145215282344414477552626689778
ферментативного85163930128911532243133744495115736357087758509199771046
анализа19336393012862136198268343398461
в24296393012866
той25296393012862131207
же27706393012897159
суспензии29646393012863133193268331405461536610
митохондрий36106393012888164225294364434509580650724800
(методом44456393012847134197258328399470558
Лоури).50386393012895165235304379426462
4.17.11406882012670106176245281
Определение150068820126109190268330401463542604685766828
активности23626882012670151220301375456526588657739
пируватдегидрогеназы313568820126811612393093854545235946577208008709481019108211451226129613521462
(ПирДГ)46326882012646155236314411498544
при52116882012681159239
помощи21647123012681151247316435515
реакции27147123012678140210291372452533
с32817123012663
тетразолиевым33797123012668131199277348405473552633695771880975
синим43897123012663144223303399